Biogradetech细胞凋亡多维分析的试剂盒方案

细胞凋亡是细胞对环境的生理和病理刺激信号、环境条件的变化或对姑息性损伤的有序变化作出反应的一种死亡过程。细胞凋亡涉及DNA断裂、细胞膜结构、线粒体膜电位和蛋白表达等一系列形态学和分子变化。Biogradetech开发了一系列用于细胞凋亡多维分析的试剂盒。

类别 检测方法

形态学 显微镜观察

细胞功能 线粒体膜电位检测，膜联蛋白V/PI

生化标记 凋亡分子标记检测，DNA损伤检测

英文名称 中文名称 规格 货号

One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence) 一步法，TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光） 50T D-AKK2010

One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Red Fluorescence) 一步法，TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（红色荧光） 50T D-AKK2011

Annexin V-AF 488/PI Apoptosis Detection kit Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒 50T D-AKE0002

接下来一起看看艾美捷Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒吧~

AnnexinV-AF488/PI细胞凋亡检测试剂盒提供了一种快速方便的细胞凋亡检测方法。在所提供的结合缓冲液中用膜联蛋白V-AF 488/PI细胞凋亡检测试剂盒对细胞群体进行染色后，早期凋亡细胞显示细胞膜的绿色荧光，死细胞显示细胞核的红色荧光和细胞膜的红色荧光，活细胞显示很少或没有荧光。此外，为了解决细胞凋亡检测和结果的不标准化问题，该试剂盒还提供了一种获得专利的细胞凋亡阳性参考物质。检测可以通过流式细胞术或荧光显微镜进行分析。

Cat #: D-AKE0002

Size: 50T

Storage: Stored at -20°C for 12 months, protected from light

Annexin V-AF 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒供应材料和储存条件：

化验程序：

I细胞凋亡诱导阳性

1.对于要诱导细胞凋亡的培养细胞，将凋亡诱导剂A或凋亡诱导剂B按1:1000-1:3000的体积比加入培养基中（凋亡诱导器A和凋亡诱导器B可以一起珠状加入培养基）。

2.在4、8、12、16或24小时后观察到细胞凋亡。大多数情况下，在16-24小时后，在光学显微镜下可以看到细胞形态的明显变化，这可以用来观察细胞凋亡染色（建议调整不同细胞的诱导时间和浓度）。

l膜联蛋白V-AF 488/PI检测细胞凋亡

A.流式细胞术定量

1.使用所需的方法诱导细胞凋亡。通过在没有诱导剂的情况下孵育细胞来制备阴性对照。

2.离心（4°C，300g，5min）收集1-2×105个细胞，用冰冷的PBS洗涤两次。

注：对于粘附细胞，先用胰蛋白酶（不含EDTA）消化细胞，然后离心。胰蛋白酶化的时间不宜过长，因为胰蛋白酶会破坏膜的结构。

3.将细胞重新悬浮于100μL 1xAnnexin V结合缓冲液中。

4.向每100μL细胞悬浮液中加入5μL膜联蛋白V-AbFluor’M 488和2μL PI，轻轻混合。

5.将细胞在室温下在黑暗中培养15分钟。

6.培养期结束后，加入400μL 1xAnnexin V结合缓冲液，轻轻混合，并将样品置于冰上。在染色后30分钟内通过流式细胞术分析细胞。使用491 nm和535 nm激发并测量荧光

517nm（FITC通道）和617nm（PE或PI通道）附近的发射。

B.荧光显微镜检测

1.对于悬浮细胞

1） 按照流式细胞仪的方案从步骤A.1到步骤A.6。

2） 将步骤A.6中的细胞悬浮液放在载玻片上。用玻璃盖玻片盖住细胞。尽快使用合适的过滤器通过荧光显微镜分析细胞（Annexin V-AbFluor’M 488可以使用FITC设置成像，而Pl可以使用Cy°3或Texas Redo设置成像）。

2.对于粘附细胞，建议的方案如下：

1） 在盖玻片或室玻片上培养细胞。

2） 使用所需方法诱导细胞凋亡。通过在没有诱导剂的情况下孵育细胞来制备阴性对照。

3） 用PBS洗涤细胞两次，预热或在室温下。

4） 制备工作溶液：向每100μL 1xAnnexin V结合缓冲液中加入5μL Annexin V-AbFluor“M 488和2μL PI，轻轻混合。

5） 向细胞中加入适量的工作溶液，在室温下在黑暗中孵育15分钟（可以在冰上进行孵育以减缓细胞凋亡过程，但孵育时间至少延长到30分钟）。

6） 用1xAn-nexin V结合缓冲液洗涤细胞两次。

注意：在此步骤中，不要使用PBS清洗细胞。

7） 用一滴1xAnnexin V结合缓冲液将盖玻片固定在载玻片上。对于载玻片上的细胞，添加足够的

1xAnnexin V结合缓冲液，完全覆盖细胞。

注：也可以使用抗荧光猝灭剂。

8） 尽快使用合适的过滤器通过荧光显微镜分析细胞。

免责声明

仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

Biogradetech是生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。