BPS Bioscience CD36 HEK293 细胞系-78526-L：研究与应用指南

CD36 HEK293细胞系是一种克隆的HEK293细胞系，稳定表达全长人CD36。与母体HEK293细胞系相比，选择了两种细胞系以获得中等和高水平的CD36表达。

背景

CD36（分化簇36）也被称为血小板糖蛋白4、脂肪酸转运蛋白（FAT）、清道夫受体B类成员3（SCARB3）和糖蛋白88（GP88）。它在多种细胞类型中表达，包括红细胞、单核细胞、分化的脂肪细胞、骨骼肌细胞、乳腺和肠道上皮细胞以及内皮细胞。CD36是血小板表面存在的主要糖蛋白之一。

CD36具有复杂的生物功能，具体取决于细胞类型和配体。CD36是基质蛋白（如胶原蛋白、纤维连接蛋白和血小板反应蛋白）的糖蛋白受体，作为粘附分子发挥作用。它与血小板反应蛋白的结合有助于血管生物学和血管生成，同时也能结合氧化磷脂、低密度脂蛋白、脂蛋白和长链脂肪酸等脂质。配体诱导的CD36簇的形成启动信号转导和受体-配体复合物的内吞作用。CD36通过将其脂质配体导入细胞并促进长链脂肪酸的细胞摄取，调节细胞的脂肪酸代谢，从而参与肌肉代谢、脂肪细胞中的能量储存以及肠道中膳食脂肪的处理。

CD36与多种涉及免疫和血管系统的疾病相关，并且在脂质代谢重要的疾病中，如糖尿病和肥胖、炎症、动脉粥样硬化、心脏病和阿尔茨海默病等。此外，由于脂质是肿瘤细胞的重要能量来源，CD36与癌症相关。因此，在多种癌症类型中观察到CD36表达上调，并与不良临床结果相关。最后，CD36通过介导受寄生虫感染的红细胞与疟疾相关的粘附能力，参与疟疾的发生。

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应用

- 鉴定针对CD36的抗体。

- 筛选抑制剂或中和抗体对CD36的结合。

细胞培养协议

细胞复苏

1. 从液氮储存中取出细胞瓶，保持在干冰上，直到准备复苏。

2. 当准备复苏时，将冷冻细胞瓶在37°C水浴中旋转约60秒。一旦细胞复苏（可能会稍快或稍慢于60秒），迅速将瓶内全部内容物转移到一个空的50毫升锥形管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞时间过长会导致细胞活力迅速下降。

3. 使用10毫升血清移液管，缓慢向含有细胞的锥形管中加入10毫升预热的复苏培养基1。复苏培养基1应逐滴加入，同时轻轻摇动锥形管以促进混合，避免渗透压冲击。

4. 立即以300 x g离心细胞5分钟，去除培养基，并将细胞重悬于5毫升预热的复苏培养基1中。

5. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2的培养箱中孵育。

6. 培养24小时后，检查细胞附着和活力。更换为新鲜的复苏培养基1，并继续在37°C、5% CO2的培养箱中培养，直到细胞准备分裂。

7. 在细胞完全融合之前应进行传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基1V。

细胞传代

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 细胞分离后，加入生长培养基1V并转移到管中。

3. 以300 x g离心细胞5分钟，去除培养基，并将细胞重悬于生长培养基1V中。

4. 按推荐的亚培养比例1:6至1:8每周或每周两次播种到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗涤细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 细胞分离后，加入生长培养基1V并计数细胞。

3. 以300 x g离心细胞5分钟，去除培养基，并将细胞重悬于4°C细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中，浓度约为2 x 10^6细胞/ml。

4. 将1毫升细胞悬液分配到每个冷冻管中。将冷冻管放入绝缘容器中以慢速冷却，并在-80°C下存放过夜。

5. 第二天将冷冻管转移到液氮中进行长期储存。

注意：建议在早期传代扩展细胞并冷冻至少10个冷冻管以备将来使用。

图1：CD36 HEK293细胞系中CD36的细胞表面表达。

一百万个细胞用5 ?l PE标记的抗CD36抗体（BioLegend #336206）在冰上染色30分钟，洗涤三次，并通过流式细胞仪分析。CD36 HEK293细胞系高表达细胞（蓝色）和中等表达细胞（红色）与母体HEK293细胞（绿色）进行比较。Y轴表示细胞计数，X轴表示PE强度。

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