BPS Bioscience CD36 HEK293 细胞系-78526-H：表达人CD36的稳定克隆细胞

CD36 HEK293细胞系是一种稳定表达全长人类CD36的克隆HEK293细胞系。与亲本HEK293细胞系相比，选择了两种细胞系，分别具有中等和高水平的CD36表达。

背景

CD36（分化簇36）也被称为血小板糖蛋白4、脂肪酸转运蛋白（FAT）、清道夫受体B类成员3（SCARB3）和糖蛋白88（GP88）。它在许多细胞类型中表达，包括红细胞、单核细胞、分化的脂肪细胞、骨骼肌细胞、乳腺和肠道上皮细胞以及内皮细胞。CD36是血小板表面存在的主要糖蛋白之一。

CD36具有复杂的生物学功能，这取决于细胞类型和配体。CD36是基质蛋白（如胶原蛋白、纤维连接蛋白和血小板反应蛋白）的糖蛋白受体，作为粘附分子。它与血小板反应蛋白的结合有助于血管生物学和血管生成，并且它还结合脂质，如氧化磷脂和低密度脂蛋白、脂蛋白和长链脂肪酸。配体诱导的CD36簇的形成启动了信号转导和受体-配体复合物的内化。CD36通过将脂质配体导入细胞内，并通过促进细胞对长链脂肪酸的摄取，调节细胞的脂肪酸代谢，从而参与肌肉代谢、脂肪细胞中的能量储存以及肠道中膳食脂肪的处理。

CD36涉及多种涉及免疫和血管系统的疾病，以及脂质代谢重要的疾病，如糖尿病和肥胖、炎症、动脉粥样硬化、心脏病和阿尔茨海默病。此外，由于脂质是肿瘤细胞的重要能量来源，CD36与癌症相关。因此，在多种癌症类型中观察到CD36表达上调，并与不良临床结果相关。最后，它通过介导由寄生虫引起的疾病，疟原虫（Plasmodium falciparum）感染的红细胞的粘附能力，在疟疾中发挥作用。

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应用

? 对抗CD36的抗体的特性鉴定。

? 筛选抑制剂或中和抗体对CD36的结合。

细胞培养协议

细胞复苏

1. 从液氮储存中取出细胞瓶。在准备解冻前，将其保持在干冰上。

2. 准备解冻时，将装有冷冻细胞的瓶子在37°C水浴中旋转大约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶内的全部内容转移到一个空的50毫升锥形管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞时间过长会导致细胞活力迅速下降。

3. 使用10毫升血清移液管，缓慢向含有细胞的锥形管中加入10毫升预热的解冻培养基1。解冻培养基1应逐滴加入，同时轻轻摇动锥形管以实现温和混合，避免渗透冲击。

4. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并将细胞在5毫升预热的解冻培养基1中重悬。

5. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

6. 培养24小时后，检查细胞附着和活力。更换为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好分裂。

7. 在细胞完全融合之前应进行传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基1V。

细胞传代

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1V并转移到管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并将细胞在生长培养基1V中重悬。

4. 按推荐的亚培养比例1:6至1:8每周或每周两次播种到新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗涤细胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1V并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并将细胞在4°C细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬，浓度约为2 x 10^6细胞/毫升。

4. 将1毫升细胞悬液分配到每个冷冻管中。将管放入绝缘容器中进行慢速冷却，并在-80°C下过夜储存。

5. 次日将管转移到液氮中进行长期储存。

注意：建议在早期传代扩展细胞并至少冷冻10个管以备将来使用。

图1：CD36 HEK293细胞系中CD36的细胞表面表达。

一百万个细胞用5微升PE偶联的抗CD36抗体（BioLegend #336206）在冰上染色30分钟，洗涤三次，并通过流式细胞仪分析。CD36 HEK293细胞系高表达细胞（蓝色）和中等表达细胞（红色）与亲本HEK293细胞（绿色）进行比较。Y轴代表细胞计数。X轴表示PE强度。

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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