BPS Bioscience GLP-1R/CRE 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系,糖尿病治疗研究工具

GLP-1R/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种工程化的HEK293细胞系，表达受cAMP反应元件（CRE）控制的萤火虫荧光素酶和人类GLP-1R（胰高血糖素样肽1受体；登录号BC113493）。通过测量荧光素酶活性，可以监测这些细胞中GLP-1R的激活。

GLP-1R/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系的功能已通过使用肽类激动剂胰高血糖素样肽1（7-37）、胰高血糖素样肽1（7-36）酰胺、Exendin-4、利西那肽、度拉糖肽中的GLP-1部分、塞美格鲁肽、曲普瑞肽和Retatrutide的剂量反应实验进行了验证。该细胞系还通过使用小分子激动剂Danuglipron的剂量反应实验进行了验证。GLP-1R/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系对激动剂的响应是通过剂量依赖性方式诱导荧光素酶活性。使用Exendin（9-39）验证了该细胞系中激动剂诱导的荧光素酶活性的抑制。

背景

GLP-1R是B类家族的G蛋白偶联受体（GPCRs或分泌素样受体）的成员，是一种主要在胰岛β细胞和脑神经元中发现的跨膜蛋白。GLP-1R由肽类激素胰高血糖素样肽1（GLP-1）激活，有两种活性形式，GLP-1（7-37）和GLP-1（7-36）酰胺。GLP-1R在控制血糖水平中发挥重要作用，通过增强葡萄糖刺激的胰岛素分泌、葡萄糖、脂质代谢和饱腹感。它在大脑中的作用似乎是控制食欲。

研究工作集中在调节GLP-1R介导的信号通路作为2型糖尿病（T2DM）的治疗方法，并导致了几种GLP-1 FDA批准的激动剂的开发。除了在胰岛素分泌中的作用外，GLP-1R激动剂还可以有助于体重管理，降低心血管疾病的潜力，并保护β细胞。正在研究其在T2DM患者肿瘤发展中的作用，但需要进一步的研究来完全理解GLP-1R及其激动剂的功能。

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细胞培养协议

注意：HEK293细胞源自人类材料，因此建议采取适当的安全预防措施。

细胞解冻

1. 在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到含有10 ml预热的解冻培养基1的试管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在5 ml预热的解冻培养基1中重悬。

3. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好分裂。

5. 细胞应在完全融合前传代。在首次传代及后续传代中，使用生长培养基1A。

细胞传代

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1A并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在生长培养基1A中重悬。

4. 按照推荐的亚培养比例1:5至1:8，每周一次或两次将细胞种入新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% 胰酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1A并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬，细胞浓度约为2 x 10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图. 通过流式细胞仪分析GLP-1R/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞系表面GLP-1R的表达。

GLP-1R/CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞（绿色）或对照CRE荧光素酶报告基因HEK293细胞（蓝色）使用人类GLP-1R PE偶联抗体（R&D Systems #FAB2814P）染色，并通过流式细胞仪分析。Y轴代表细胞数量百分比。X轴表示PE的强度。

BPS Bioscience是一家通过ISO 9001:2015认证的生命科学领域的供应商，公司一直致力于开发药物研发领域的重组蛋白酶、蛋白酶活性/抑制剂筛选试剂盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年创立，从创立至今一直致力于提供药物研发领域的创新解决方案，以推动新的药物发现。公司主要关注的领域包括免疫疗法、表观遗传学、新型冠状病毒、CRISPR、细胞信号转导等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、组蛋白去甲基化酶、组蛋白甲基化转移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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