BPS Bioscience 基因调控与药物筛选平台：RARγ 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系

RARγ荧光素酶报告基因HEK293细胞系是一种经过工程改造的HEK293细胞系，表达由视黄酸反应元件（RARE）控制的萤火虫荧光素酶，并含有全长人类RARγ（视黄酸受体γ）（登录号# P13631-1）。RARγ荧光素酶报告基因HEK293细胞系旨在监测RARγ的活性。该细胞系通过全反式视黄酸刺激和西方印迹分析进行了功能性验证。

图1：RARγ荧光素酶报告基因HEK293细胞系的作用机制图示。在视黄酸激活后，RAR与RXR二聚化，并激活RARE和荧光素酶表达。激活水平与荧光素酶信号直接对应。

背景：

视黄酸受体γ（RARγ），也称为NR1B3（核受体亚家族1，组B，成员3），属于核受体家族，有三种亚型，即RARα、RARβ和RARγ。RAR与视黄酸X受体（RXR）异二聚化，并作为转录因子调节正常和恶性细胞的生长和分化。当RAR与其配体结合，全反式视黄酸或9-顺式视黄酸时，RAR/RXR异二聚体结合到目标基因启动子区域的视黄酸反应元件，并招募共激活蛋白，导致转录和下游目标基因的表达。RARγ可在T细胞中找到，它参与胸腺细胞发育和CD8+ T细胞反应。在造血过程中，它在造血干细胞中高水平存在。它可能作为一种癌基因，导致结直肠癌、肾癌和肝细胞癌以及急性髓细胞性白血病（AML）。开发RAR拮抗剂，无论是选择性的还是广谱特异性的，可能在癌症治疗中证明是一种有用的治疗选择。

作为BPS Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐BPS Bioscience热销产品RARγ 荧光素酶报告基因 HEK293 细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

应用：

- 监测RARγ调控的信号通路活性。

- 筛选RARγ的激动剂或拮抗剂。

细胞培养协议：

注意：HEK293细胞源自人类材料，因此建议采取适当的安全预防措施。

细胞解冻：

1. 在37°C水浴中旋转冷冻细胞瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将瓶中的内容转移到含有10毫升预热的解冻培养基6的管中。在37°C水浴中放置细胞太久会导致活性迅速丧失。

2. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在5毫升预热的解冻培养基6中重悬细胞。

3. 将重悬的细胞转移到T25培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

4. 培养24小时后，检查细胞附着和活力。更换为新鲜的解冻培养基6，并在37°C、5% CO2培养箱中继续培养，直到细胞准备好传代。

5. 细胞应在完全融合前传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基6A。

细胞传代：

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% Trypsin/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基6A并转移到管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在生长培养基6A中重悬细胞。

4. 按照推荐的次培养比例1:10至1:20每周两次将细胞种植到新的培养容器中。

细胞冷冻：

1. 抽吸培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% Trypsin/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1G并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基，并在4°C细胞冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬细胞，细胞浓度约为2 x 10^6细胞/ml。

4. 将1毫升的细胞悬浮液分装到每个冷冻瓶中。将瓶子放入绝缘容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 次日将瓶子转移到液氮中进行长期存储。

注意：建议扩展细胞并在早期传代时至少冷冻10瓶细胞以备将来使用。

图:RARγ在RARγ荧光素酶报告基因HEK293细胞系中的表达。在RARγ荧光素酶报告细胞（泳道2）和HEK293细胞中进行Western Blot分析（泳道3）用抗人RARγ抗体（圣克鲁斯生物技术公司#sc-398065）。表达GAPDH用作负荷对照。分子量标记如泳道1所示。

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Products Catalog # Size

RARα Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 60503 2 vials

RARβ Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 60603 2 vials

RARα Reporter Cellular Assay Pack 79322 2 vials

RARβ Reporter Cellular Assay Pack 79323 2 vials

RARγ Reporter Cellular Assay Pack 79324 2 vials

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