PCSK9-LDLR TR-FRET实验试剂盒旨在以均相384孔反应格式测量对PCSK9与LDLR结合的抑制作用。PCSK9已知通过与LDLR胞外结构域结合,作为肝脏低密度脂蛋白受体(LDLRs)的负调节因子发挥作用。基于FRET的实验无需繁琐的洗涤步骤,使其特别适用于高通量筛选应用。实验操作流程简单直接:将含有Eu(铕)标记的LDLR胞外结构域、染料标记的受体、生物素标记的PCSK9以及抑制剂的样品孵育两小时。随后,使用荧光读数仪测量荧光强度。
艾美捷PCSK9-LDLR TR-FRET检测试剂盒:
货号:BPQ-72010
别名:pcsk9、胆固醇、LDL、kexin
实验试剂盒形式:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
物种:人
提供形式:试剂盒采用便捷的格式,包含生物素标记的PCSK9、Eu(铕)标记的LDLR、染料标记的受体、实验缓冲液和微孔板,可进行384次反应。
所需材料(但未提供):
能够测量时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)的荧光微孔板读数仪
可调节微量移液器及无菌吸头
储存/稳定性:按照说明储存时,该试剂盒自收到之日起有效期至少为6个月。
应用:适用于筛选小分子抑制剂,用于药物发现和高通量筛选(HTS)应用。
运输温度:-80°C
注意事项:避免反复冻融。
结果计算:
应进行两次连续测量。首先测量Tb(铽)供体的发射光(620 nm),随后测量染料受体的发射光(665 nm)。数据分析通过计算TR-FRET比值(665 nm发射光/620 nm发射光)进行。
如果需要,数据可以归一化为抑制百分比。通常在抑制剂筛选中,将阳性对照的FRET值设为0%抑制,阴性对照的FRET值设为100%抑制。
实验结果示例:
图:PCSK9与LDLR的相互作用。
文献参考:
1. Chan, J.C. et al. (2009). Proc. Natl Acad. Sci. USA, 106, 9820-9825.
2. Liang, H., et al. (2012) J. Pharmacol. Exp. Ther. 340 2289-236.
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