HDAC6荧光检测试剂盒实验前准备&结果示例

荧光法HDAC6实验试剂盒是一个完整的实验系统，旨在用于测量组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）的活性，适用于筛选和分析应用。该试剂盒采用便捷的96孔格式，包含进行100次荧光HDAC6活性测定所需的所有试剂。此外，试剂盒还包含纯化的HDAC6酶和一种强效的HDAC抑制剂——TSA（Trichostatin A），用于作为阳性和阴性对照。荧光法HDAC6实验试剂盒基于一种独特的荧光底物和显色剂组合。该实验方法避免了传统实验中涉及的放射性、提取和色谱分析步骤。使用该试剂盒，只需在微孔板上进行两个简单的步骤即可分析HDAC活性水平。首先，将含有乙酰化赖氨酸侧链的HDAC荧光底物与纯化的HDAC酶孵育。去乙酰化作用使底物变得敏感，随后用赖氨酸显色剂处理时会产生荧光物质，该物质可通过荧光读数仪进行测量。

HDAC通过催化修饰蛋白中乙酰赖氨酸的乙酰基水解来调节细胞过程。在HDAC实验中，荧光染料分子被连接到含有乙酰赖氨酸的肽段上。连接到肽段上会猝灭染料的荧光。经过HDAC处理后，将反应混合物与特异性针对非乙酰化赖氨酸的显色溶液混合。如果HDAC已从赖氨酸上去除乙酰基，该溶液将释放染料，从而允许荧光产生。因此，荧光与HDAC活性直接相关。

艾美捷HDAC6荧光检测试剂盒（#BPQ-50076-1）应用：  

适用于研究酶动力学和筛选小分子抑制剂，用于药物发现和高通量筛选（HTS）应用。

所需材料（但未提供）：  

0.1%溶液（1 mg/ml）的牛血清白蛋白（BSA）水溶液  

能够在350-380 nm激发和440-460 nm检测的荧光光度计  

可调节微量移液器及无菌吸头  

旋转或摇床平台  

实验前准备：  

1) 用HDAC实验缓冲液将TSA（Trichostatin A）的DMSO（200 ?M）母液稀释10倍，制成20 ?M溶液。（仅制备实验所需的量；将剩余的TSA DMSO（200 ?M）母液分装后在-80°C下保存）。  

2) 用HDAC实验缓冲液将荧光HDAC底物3（5 mM）母液稀释25倍，制成200 ?M溶液。（仅制备实验所需的量；将剩余的5 mM母液分装后在-80°C下保存）。  

3) 用HDAC实验缓冲液将重组人HDAC6酶稀释至7 ng/?l（35 ng/反应）*。将剩余的酶分装后在-80°C下保存，稀释后的酶需置于冰上。使用后丢弃剩余的稀释酶。*注：最佳酶浓度可能因酶的比活性而异。

实验结果示例：  

使用BPS Bioscience产品目录号50076的荧光法HDAC6实验试剂盒测量的HDAC6酶活性。荧光使用Bio-Tek荧光微孔板读数仪测量。数据为批次特异性。

文献参考：

1. Santo, L., et al., Blood. 2012 Mar 15;119(11):2579-89.

2. Bradner, J.E., et al., Nat Chem Biol. 2010 Mar;6(3): 238-243.