Cdc42 G-LISA GTPase活化检测试剂盒--3小时定量捕获GTP结合态Cdc42

一、实验原理

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的Cdc42 G-LISA GTPase活化检测试剂盒（比色法）（货号：BK127）采用96孔板格式，孔内预包被Cdc42-GTP结合蛋白。当细胞或组织裂解液加入孔中时，具有活性的GTP结合态Cdc42会与孔内结合蛋白特异性结合，而无活性的GDP结合态Cdc42则在洗涤步骤中被去除。随后，使用Cdc42特异性抗体检测已结合的活性Cdc42，再通过HRP标记的二抗和比色底物进行显色反应。通过比较活化裂解液与未活化裂解液的读数，即可确定Cdc42的活化程度。在细胞培养中，通常通过血清饥饿处理来实现Cdc42的失活。

二、产品描述

本试剂盒适用于检测细胞和组织裂解液中活化的（GTP结合态）Cdc42蛋白。当裂解液样本量有限时（如原代细胞培养），本方法是最佳选择。其应用范围包括：研究Cdc42信号通路、筛选Cdc42活化抑制剂等。

三、试剂盒内容

试剂盒提供24至96次检测所需材料，条状孔设计支持单次或多次运行。内容包括：96孔Cdc42-GTP结合板、抗Cdc42抗体、HRP标记二抗、Cdc42对照蛋白（持续活化型）、细胞裂解缓冲液（优化用于维持GTP结合态GTP酶）、结合缓冲液、洗涤缓冲液、抗原呈递缓冲液、抗体稀释缓冲液、HRP比色检测试剂A和B、HRP终止液、Precision Red先进蛋白检测试剂、蛋白酶抑制剂混合物及条板支架。

四、所需设备与材料

用户需自备：细胞裂解液、细胞刮刀、浓硫酸（1 ml）、液氮（用于速冻裂解液）、轨道微板振荡器（至少200 rpm，分别置于4°C和室温）、多孔移液器及微板分光光度计（490 nm）。

五、生物活性检测流程

该检测利用效应蛋白的Cdc42/Rac结合结构域（PBD）偶联至96孔条板，捕获活性Cdc42。结合后的Cdc42通过基于ELISA的比色法及Cdc42特异性抗体进行检测和定量。

六、关键特性

定量检测

检测灵敏度：活化Cdc42在20 pg – 3 ng范围内呈线性

检测特异性：Cdc42

样本需求量：每次检测需10 – 50 ?g细胞或组织裂解液

检测时间：约3小时

文献参考

1. Lerm M., et al. 1999. Deamidation of Cdc42 and Rac by Escherichia coli cytotoxicnecrotizing factor 1: activation of c-Jun N-terminal kinase in HeLa cells. Infectionand immu-nity. 67, 496-503.