RhoA/Rac1/Cdc42活化检测组合试剂盒，从裂解到检出全配齐，对照试剂一步到位

产品概述

由艾美捷代理Cytoskeleton推出的RhoA/Rac1/Cdc42活化检测组合试剂盒（磁珠Pull-down格式）（货号 BK030）是一款用于检测细胞和组织裂解液中活化态（GTP 结合型）Cdc42、Rac1 及 RhoA 蛋白的组合试剂盒。该试剂盒采用磁珠 pull-down 格式，可同时比较 Cdc42、Rac1 与 RhoA 三条信号通路的活化状态，每项 GTPase 可完成 10 次检测。

试剂盒组成

本试剂盒包含三类 GTPase 检测所需的核心组分：

RhoA 检测模块：Rhotekin-PBD 磁珠（用于亲和纯化活性 RhoA、B、C）、RhoA 特异性抗体（仅检测活化态 RhoA）、His-RhoA 对照蛋白。

Cdc42/Rac1 检测模块：PAK-PBD 磁珠（用于亲和纯化活性 Cdc42 与 Rac）、Cdc42 特异性抗体（仅检测活化态 Cdc42）、Rac1 特异性抗体（仅检测活化态 Rac1）、His-Cdc42 与 His-Rac1 对照蛋白。

通用缓冲液与对照试剂：细胞裂解缓冲液（优化以维持 GTP 结合型 GTPase 稳定性）、洗涤缓冲液（同样优化用于维持活性构象）、上样缓冲液、STOP 缓冲液、GTPγS、GDP、蛋白酶抑制剂混合物及用于复溶的 DMSO。

自备设备与材料

使用本试剂盒需自备细胞裂解液、细胞刮刀、液氮（用于速冻裂解液）、Western blot 所需设备与试剂、微量离心机等。

检测原理

Rho 家族小 GTP 酶包含至少 20 个成员，其中 Rac1、RhoA 与 Cdc42 研究最为广泛。与所有小 G 蛋白类似，Rho 蛋白作为分子开关，在活性 GTP 结合态与非活性 GDP 结合态之间循环，通过效应蛋白传递细胞信号，参与细胞骨架重排、转录调控、DNA 合成、膜运输及凋亡等多种过程。

Rho 家族效应蛋白能够特异性识别 GTP 结合（活性）形式的 GTPase，这一特性被用于开发高效的亲和纯化活化检测（pull-down）实验。本试剂盒正是基于该原理，利用 Rhotekin-PBD 与 PAK-PBD 磁珠分别捕获活性 RhoA 与活性 Rac1/Cdc42，再以特异性抗体进行免疫印迹检测。

关键参数

检测类型：半定量 assay

检测特异性：Rac1、Cdc42 与 RhoA 蛋白（详见 BK035、BK034、BK036 规格）

起始样本量：每次实验需 200 ug 至 1 mg 细胞或组织裂解液

实验时长：约 10 小时，通常分两天完成

应用建议

该组合试剂盒适用于需要同时评估 RhoA、Rac1 与 Cdc42 三条通路活化状态的实验场景。建议每次实验设置 GTPγS（锁定活性构象）与 GDP（锁定非活性构象）对照，以验证磁珠特异性和实验体系性能。裂解液应速冻保存，避免反复冻融以维持 GTPase 活性。由于三个模块共用裂解与洗涤缓冲液体系，可确保不同 GTPase 检测条件的一致性，便于横向比较信号通路间的活化差异。

文献参考

1. Ridley, A.J. & Hall, A. 1992. The small GTP-binding protein Rho regulates the assembly of focaladhesions and actin stress fibers in response to growth factors. Cell. 70, 389-399.

2. Ridley, A.J. et al. 1992. The small GTP-binding protein Rac regulates growth factor-inducedmembrane ruffling. Cell. 70, 401-410.

3. Nobes, C.D. et al. 1995. Rho, Rac, and Cdc42 GTPases regulate the assembly ofmultimolecular focal complexes associated with actin stress fibers, lamellipodia, and filopodia.Cell. 81, 53-62.

4. Waterman-Storer, C.M. et al. 1999. Microtubule growth activates Rac1 to promote lamellipodialprotrusion in fibroblasts. Nature Cell Biol. 1, 45-50.

5. Hill, C.S. et al. 1995. The Rho family GTPases RhoA, Rac1, and Cdc42Hs regulatetranscriptional activation by SRF. Cell. 81, 1159-1170.