抗PDHE 1-B|丙酮酸脱氢酶E1组分亚基β-1,线粒体的作用与研究

PDHE1-B（丙酮酸脱氢酶E1组分亚基β-1）是丙酮酸脱氢酶复合物（PDC）的E1β亚基，催化丙酮酸向乙酰辅酶A和CO2的整体转化。

艾美捷抗PDHE 1-B|丙酮酸脱氢酶E1组分亚基β-1,线粒体：

货号：AS23-4975

免疫原：来自拟南芥（Arabidopsis thaliana）PDHE1-B蛋白序列的KLH偶联独特肽，UniProt: Q38799 TAIR: AT5G50850  

宿主：兔  

克隆性：多克隆  

纯度：抗原亲和纯化血清，溶于pH 7.4的PBS中  

形式：冻干  

数量：50 ug  

复溶：复溶时，加入50 ?l无菌或去离子水。  

储存：冻干/复溶后存放于-20°C；复溶后请分装以避免反复冻融。打开前请简短离心以避免冻干物粘附于管盖或管壁导致损失。  

测试应用：Western blot (WB)  

推荐稀释度：1 : 500 - 1: 2000 (WB)  

预期 | 表观分子量：39.2 | 37 kDa（信号肽被移除）  

确认反应性：拟南芥  

预测反应性：花生（Arachis hypogaea）、短柄草（Brachypodium distachyon）、甘蓝型油菜（Brassica napus）、大麻（Cannabis sativa）、辣椒（Capsicum annuum）、柑橘（Citrus sp.）、黄瓜（Cucumis sativus）、大豆（Glycine max）、棉花（Gossypium sp.）、大麦（Hordeum vulgare）、苹果（Malus domestica）、木薯（Manihot esculenta）、苜蓿（Medicago truncatula）、烟草（Nicotiana tabacum）、水稻（Oryza sativa）、豌豆（Pisum sativum）、杨树（Populus sp.）、番茄（Solanum lycopersicum）、马铃薯（Solanum tuberosum）、高粱（Sorghum bicolor）、菠菜（Spinacia oleracea）、可可（Theobroma cacao）、小麦（Triticum sp.）、葡萄（Vitis vinifera）、玉米（Zea mays）  

无反应性：目前尚无已知的与预测反应性不符的例外情况  

样品：

1 - 40 ug拟南芥Col-0全叶提取物。  

2 - 40 ug拟南芥突变体iar4（AT1G24180），拟南芥丙酮酸脱氢酶E1a样亚基。  

3 - 40 ug拟南芥突变体iar4l-1（AT1G59900），拟南芥丙酮酸脱氢酶E1a亚基。  

4 - 40 ug拟南芥突变体iar4l-2（AT1G59900），拟南芥丙酮酸脱氢酶E1a亚基。  

5 - 40 ug拟南芥突变体SALK_004367C（AT5G50850），拟南芥丙酮酸脱氢酶E1组分亚基β-1。T-DNA插入位于AT5G50850的3'UTR区域，因此SALK_004367C可能不是mtPDH-E1b的敲除突变体。  

从拟南芥全莲座叶中新鲜提取的总蛋白40 ug/孔。精确的缓冲液成分包括：50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.5 mM EDTA、10%（v/v）甘油、1%（v/v）Nonidet P-40（NP-40）、1%（w/v）脱氧胆酸钠、0.1%（w/v）SDS、1 × Complete蛋白酶抑制剂混合物（Roche）、1 mM PMSF，并用5xSDS样品缓冲液（300 mM Tris-HCL(pH 6.8)、10% SDS、0.1%溴酚蓝、50%甘油、500 mM DTT）在95°C/5分钟下变性。样品在室温下在10% SDS-PAGE上分离，并用iBlotu Dry Blotting System（Invitrogen）在室温下转移到硝酸纤维素膜（孔径0.2 um）7分钟。膜用5%牛奶在室温下振荡封闭3小时。然后将膜在2%牛奶中1: 500稀释的一抗中振荡过夜/4°C。弃去一抗溶液，膜简短冲洗两次，然后在室温下振荡用PBS-T洗涤5次，每次5分钟。膜在2%牛奶中1: 5000稀释的匹配二抗（抗兔IgG辣根过氧化物酶偶联）中振荡孵育1小时/室温。膜按前述方法洗涤，并用AS16 ECL-N-10 Agrisera Bright化学发光检测试剂显影。曝光时间为1分钟。

为了提高信噪比，一抗可以使用1: 1000或1: 2000稀释度，在室温下孵育1小时。

感谢瑞士日内瓦大学植物学与植物生物学系的Mengping Li博士提供