HY5|蛋白质长下胚轴5，调控植物光形态建成的关键因子

HY5（蛋白质长下胚轴5）是一种光调节转录因子，在光照下促进光形态形成。参与蓝光特异性途径。异二聚体。在根、下胚轴、子叶、叶、茎和花器官中表达。位于细胞核内。替代名称：蛋白质长亚丙基5，bZIP转录因子56，AtbZIP56。

艾美捷HY5|蛋白质长下胚轴5：

货号：AS12-1867

免疫原：与KLH偶联的肽段，源自拟南芥HY5蛋白序列，UniProt编号：O24646，TAIR编号：AT5G11260。所选肽段在HY5蛋白序列中不保守。

宿主：兔

克隆性：多克隆

纯度：免疫原亲和纯化的血清，溶于pH 7.4的PBS中

形式：冻干粉

数量：50 ?g

复溶方法：复溶时加入50 ?l无菌水

储存条件：冻干粉/复溶后于-20°C保存；复溶后请分装，避免反复冻融。打开管子前请短暂离心，以避免因材料粘附在盖子或管壁上而导致的损失。

推荐稀释度：1:500至1:1000（Western Blot）

预期/表观分子量：18.5 kDa

已确认的反应性：拟南芥

预测的反应性：北京白菜

不反应的物种：柑橘、大麦、水稻、豌豆、杨树、番茄、小麦、玉米

额外信息：

该抗体可在本氏烟（Nicotiana benthamiana）中检测重组HY5蛋白。

在使用内源性提取物时，需要使用含有6-8 M尿素的提取和加载缓冲液，以便通过该抗体进行检测，或使用TCA/乙酸乙酯蛋白提取法，如Mechin等（2007）所述。

样品需在微弱绿光下采集，以避免在采集和提取过程中发生降解。

应用实例：

图：从7日龄拟南芥幼苗中新鲜提取的10 ?g总蛋白，使用三氯乙酸和乙酸乙酯（Mechin等，2007）进行提取，并用LDS（十二烷基硫酸锂）样品缓冲液在70°C下变性10分钟。蛋白在12%的SDS-PAGE上分离后，通过半干法转印至PVDF膜（孔径0.2 ?m），转印时间为7分钟。膜用5%脱脂奶粉在4°C下封闭过夜（ON），期间不断搅拌。膜在1:1000稀释的一抗中孵育2小时（室温，RT），期间不断搅拌，TBS-T缓冲液中进行。弃去一抗溶液后，膜短暂冲洗，然后在室温下用TBS-T洗涤三次，每次15分钟，期间不断搅拌。膜在Agrisera匹配的二抗（抗兔IgG辣根过氧化物酶偶联抗体，AS09 602，稀释至1:10,000）中孵育1小时（室温，RT），期间不断搅拌。膜按上述方法洗涤后，用化学发光检测试剂显色2分钟。曝光时间为100秒。

幼苗在黑暗中生长4天，随后在连续光照下（~120 ?E）生长3天。幼苗整体研磨以提取蛋白。

感谢澳大利亚国立大学（ANU）科学学院生物研究学院Pogson实验室的侯鑫提供。

HY5|蛋白质长下胚轴5文献参考：
Yao et. al. 2024).Cooperative transcriptional regulation by ATAF1 and HY5 promotes light-induced cotyledon opening in Arabidopsis thaliana. Sci Signal. 2024 Jan 2;17(817):eadf7318.  

Liu et al. (2024). Phosphorylation of Arabidopsis UVR8 photoreceptor modulates protein interactions and responses to UV-B radiation. Nat Commun. 2024 Feb 9;15(1):1221.doi: 10.1038/s41467-024-45575-7.  

Cazzonelli et al. (2019). A cis-carotene derived apocarotenoid regulates etioplast and chloroplast development. https://doi.org/10.1101/528331

Lee et al. (2017). The F-box protein FKF1 inhibits dimerization of COP1 in the control of photoperiodic flowering. Nat Commun. 2017 Dec 22;8(1):2259. doi: 10.1038/s41467-017-02476-2.

Sinclair et al. (2017) Etiolated Seedling Development Requires Repression of Photomorphogenesis by a Small Cell-Wall-Derived Dark Signal. Curr Biol. 2017 Nov 20;27(22):3403-3418.e7. doi: 10.1016/j.cub.2017.09.063.