在植物生长发育调控网络中,油菜素内酯信号通路扮演着不可替代的核心角色。而BRI1(Brassinosteroid Insensitive 1)作为该通路的首个关键受体,其功能与调控机制的研究,一直是植物发育生物学的前沿热点。针对这一研究需求,高品质的抗BRI1抗体(产品编号:AS12 1859)为科研工作者提供了一份值得信赖的解决方案。
一、产品核心特性
由艾美捷代理Agrisera推出的抗BRI1抗体(货号:AS12 1859),采用免疫原亲和纯化技术制备,以冻干粉形式提供,每管含量为50 ?g。其免疫原为一段与KLH蛋白偶联的合成多肽,该多肽序列对应拟南芥BRI1蛋白胞外结构域的特异性区域(Uniprot: O22476, TAIR: AT4G39400)。这种设计确保了抗体能够特异性识别BRI1蛋白的胞外部分,为后续实验的准确性奠定了基础。
二、应用与操作指南
该抗体经过严格验证,在免疫沉淀和蛋白质印迹法中均表现优异。在蛋白质印迹法应用中,推荐稀释比例为1:5000,这一浓度体系在保证高信噪比的同时,有效降低了抗体用量,兼顾了实验效果与经济性。
关键实验参数:
分子量特征:BRI1蛋白的理论分子量大于130 kDa,但由于其存在N-糖基化修饰,在SDS-PAGE电泳中,实际表观分子量会明显高于理论值。这一点在结果判读时需特别留意。
蛋白提取:高效的蛋白提取是实验成功的关键步骤。建议严格控制样品提取时的料液比,推荐材料与缓冲液的比例不高于15 ul/ug,以确保蛋白充分释放和稳定。
免疫沉淀应用参考:在Co-IP实验中,可使用15 ul GFP-trap beads处理200 mg植物材料,富集GFP标签蛋白,随后使用本抗体(1:5000稀释)检测与之相互作用的BRI1蛋白。
三、特异性验证与突变体研究价值
抗体的特异性是实验可靠性的生命线。本产品已在多种拟南芥突变体体系中完成验证,其卓越的区分能力为研究BRI1蛋白的亚细胞定位、累积水平及突变效应提供了有力工具:
bri1-1突变体:该突变体为激酶结构域的点突变,导致蛋白失去功能,但植物体会通过过量积累失活的受体来进行补偿。使用本抗体可清晰检测到该突变体中BRI1蛋白的积累水平显著高于野生型。
bri1-5突变体:该突变位点位于胞外结构域,导致突变蛋白滞留于内质网。此突变体中BRI1蛋白含量低于野生型,并表现为典型的油菜素内酯缺乏中间表型。值得注意的是,由于内质网滞留使其携带高甘露糖型N-聚糖,BRI1-5蛋白在SDS-PAGE中的迁移速率较野生型更慢(表观分子量更高)。这一独特的电泳迁移差异,可利用本抗体进行清晰分辨,是验证突变体表型的有力证据。
四、反应种属与适用范围
已确认反应种属:拟南芥。
预测反应种属:欧洲油菜、白菜,基于序列同源性分析。
无反应种属:大麦、水稻、番茄。对于未列出的物种,可联系技术支持进行预测评估。
五、储存与稳定性
为确保产品长期稳定性和活性,建议遵循以下操作:
1. 溶解:加入50 ul无菌水进行复溶。
2. 储存:无论是冻干粉还是复溶后,均建议储存于-20°C。
3. 分装:复溶后务必进行分装保存,避免反复冻融,这是维持抗体活性的关键。
4. 使用前:开盖前请短暂离心,确保所有冻干粉末或液体沉于管底,避免因附着在管壁或管盖而造成的损失。
此外,该产品可根据特殊要求添加Proclin防腐剂,以满足特定的实验需求。
六、背景与研究意义
BRI1不仅是油菜素内酯的直接受体,更是一种具有双重底物特异性(丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸)的激酶。它参与调控一个复杂的信号级联反应,广泛影响光响应基因和胁迫响应基因的表达、细胞伸长、叶片与叶绿体衰老以及开花时间等多个重要生理过程。因此,拥有一个经过严格验证的高质量抗BRI1抗体,是精准解析这一信号网络、阐明植物生长发育调控机制的基石。
总之,抗BRI1抗体(AS12 1859)凭借其明确的免疫原设计、广泛的应用验证、对突变体的清晰分辨能力以及严谨的操作规范,无疑是油菜素内酯信号转导研究领域中一个功能全面、性能可靠的理想工具。
文献参考:
Takagi et al. (2025). Plant-specific tail-anchored coiled-coil protein MAG3 stabilizes Golgi-associated ERESs to facilitate protein exit from the ER. Commun Biol. 2025 Mar 4;8(1):358.doi: 10.1038/s42003-025-07602-1.
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