一、产品描述
由艾美捷代理Cytoskeleton推出的Actin蛋白(>99%纯度,人血小板β/γ肌动蛋白)(货号:APHL99)是从人血小板中纯化的非肌肉肌动蛋白,同种型组成为85% β-肌动蛋白和15% γ-肌动蛋白,分子量约43 kDa,以白色冻干粉末形式提供。该产品适用于需要使用非肌肉(β/γ)肌动蛋白同种型的体外实验,包括肌动蛋白结合蛋白(ABPs)的体外表征以及肌动蛋白动态的体外研究。
二、纯度
蛋白纯度通过Coomassie染色的SDS-PAGE凝胶扫描密度测定法进行评估,APHL99纯度大于99%。
三、生物活性检测
非肌肉肌动蛋白的生物活性通过其在体外高效聚合成丝的能力进行评估,聚合后的肌动蛋白丝可通过离心沉降实验与未聚合成分分离。严格的质量控制确保在此条件下超过85%的非肌肉肌动蛋白能够发生聚合。
四、材料与安全性
用于制备非肌肉肌动蛋白的每单位血小板均已通过FDA批准的检测方法确认对HBsAg、HBcAb、HIV-1/2 ab、HIV-1 RNA、HTLV I/II ab、HCV ab、HCV RNA及梅毒检测无反应性。每单位血小板均经过ALT检测,结果低于既定阈值。产品同种型组成为85% β-肌动蛋白和15% γ-肌动蛋白,分子量约43 kDa,以冻干白色粉末形式提供。
五、储存与复溶
使用前请短暂离心,使产品收集至管底。冻干蛋白在4°C、湿度低于10%的干燥条件下可稳定保存6个月。
复溶时,使用去离子水将蛋白复溶至10 mg/ml。最佳复溶方式为在冰上或4°C条件下间歇吹打10–15分钟,复溶后将形成不透明溶液。复溶过程中请勿加热肌动蛋白。
复溶后,肌动蛋白处于以下缓冲液中:5 mM Tris-HCl pH 8.0、0.2 mM CaCl?、0.2 mM ATP、5%(w/v)蔗糖及1%(w/v)葡聚糖。浓缩蛋白应按实验用量分装,液氮速冻后储存于-70°C。在此条件下,蛋白可稳定保存6个月。
工作浓度稀释时,应使用General Actin Buffer(货号BSA01)并补充0.2 mM ATP(货号BSA04)和0.5 mM DTT。肌动蛋白是一种不稳定蛋白,操作时需格外小心,避免反复冻融。
六、纯度
蛋白纯度通过12%聚丙烯酰胺凝胶上Coomassie蓝染色蛋白的扫描密度测定法确定,非肌肉肌动蛋白纯度大于99%。

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