ALPCO 胰岛素(大鼠)ultrasentive,96w：高效检测，助力内分泌研究

ALPCO大鼠超敏胰岛素ELISA试剂盒用于定量检测大鼠血清和血浆中的胰岛素。  

本试剂盒适用于5微升或25微升的样本量。标准品和对照品的选择将根据所使用的样本量而定。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品胰岛素(大鼠)ultrasentive,96w。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

胰岛素(大鼠)ultrasentive,96w检测原理：

ALPCO大鼠超敏胰岛素ELISA是一种夹心免疫分析法。96孔微孔板用针对胰岛素的单克隆抗体包被。将标准品、对照品和样品与结合物一起加入微孔板孔中，然后在微孔板振荡器上以700-900转/分钟的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗涤缓冲液清洗孔并吸干。加入TMB底物后，再次在微孔板振荡器上以700-900转/分钟的速度孵育。第二次孵育完成后，加入终止液，通过分光光度计在450纳米处测量吸光度（OD）。生成的颜色强度与样品中胰岛素的含量成正比。  

*请参考随每个试剂盒附带的分析证书以获取更多信息。

所需材料 

- 精密移液管，用于分装5、25、75和100微升（配一次性吸头）  

- 重复或多通道移液管，用于分装75和100微升  

- 用于试剂准备的容量瓶和移液管  

- 蒸馏水或去离子水，用于试剂准备  

- 微孔板清洗器或洗液瓶  

- 能达到700-900转/分钟的微孔板振荡器  

- 带450纳米滤光片的微孔板读数仪  

- 用于样品准备的涡旋混合器  

注意事项 

1. 本试剂盒中的人类血液制品已检测HIV（人类免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）和HCV（丙型肝炎病毒）。这些病毒的检测方法不能保证病毒的完全不存在，因此所有试剂应被视为潜在传染性物质。处理和丢弃应符合所有适用的国家和地方关于潜在生物危害物质处理的规定。  

2. 所有动物源性材料均为BSE（疯牛病）阴性。然而，所有材料仍应被视为潜在传染性物质。  

3. 避免与皮肤直接接触。  

4. 本产品不可内服。  

5. 使用本产品时，避免进食、饮水或吸烟。  

6. 不要用嘴吸取任何试剂。  

7. 本试剂盒中的试剂具有批次特异性，不得替换。  

8. 不要使用过期的试剂。  

9. 不建议更改检测程序，否则可能影响检测结果。

储存条件 

试剂盒应在2-8℃下储存。试剂盒在包装标签上的有效期之前是稳定的。

检测步骤 

所有试剂和微孔板条应在使用前平衡至室温（18-25℃）。使用前轻轻混合所有试剂。每次检测运行和每块微孔板（如果一次使用多块）都必须进行标准曲线检测。所有标准品、对照品和样品应双份运行。

1. 在打开铝箔袋之前，应将微孔板平衡至室温。为标准品、对照品和样品的双份测定准备足够的微孔板条。剩余的微孔板条应密封在含有干燥剂的铝箔袋中，于2-8℃保存。  

2. 将每个标准品、对照品和样品分别加入到相应的孔中，每孔5微升或25微升（参见试剂准备和分析证书中的对照品复溶说明）。  

   - 5微升样本量：使用0.15、0.4、1、3和5.5 ng/mL（C-G）的标准品和2、3号对照品。  

   - 25微升样本量：使用0.02、0.08、0.15、0.4和1 ng/mL（A-E）的标准品和1、2号对照品。  

3. 每孔加入75微升工作浓度的结合物（参见试剂准备部分）。  

4. 用微孔板密封膜覆盖微孔板，在室温下孵育2小时，同时在微孔板振荡器上以700-900转/分钟的速度振荡。  

5. 倒掉孔中的内容物，用微孔板清洗器用工作浓度洗涤缓冲液（参见试剂准备部分）每孔350微升清洗微孔板6次。或者，使用洗液瓶将工作浓度洗涤缓冲液加入孔中（不要使用多通道移液管）。每次清洗后，倒掉液体，将微孔板倒置并用力在吸水纸上敲击。最后一次清洗（无论是自动还是手动）后，通过将微孔板倒置并用力敲击在吸水纸上，去除孔中的任何残留洗涤缓冲液和气泡。  

6. 每孔加入100微升TMB底物。  

7. 用微孔板密封膜覆盖微孔板，在室温下孵育30分钟，同时在微孔板振荡器上以700-900转/分钟的速度振荡。  

8. 每孔加入100微升终止液，并轻轻振荡微孔板以混合内容物。在进行下一步之前，去除任何气泡。  

9. 将微孔板放入能够读取450纳米吸光度的微孔板读数仪中。在加入终止液后，应立即分析微孔板，且不得超过30分钟。

结果计算 

根据标准品构建标准曲线。将零标准品作为曲线的一部分绘制。建议使用软件程序计算标准曲线并确定样品的浓度。数据分析推荐使用5参数曲线拟合。  

ALPCO大鼠超敏胰岛素ELISA是一种配体结合分析法，其反应与分析物浓度呈S形关系。目前接受的此类曲线参考模型使用5参数逻辑（pl）拟合，因为这种模型在整个范围内优化了准确性和精确性。虽然立方样条和其他方法也是可接受的，但它们通常在范围的低端和高端显示出较低的内部检测准确性和精确性。  

在下面的例子中，使用了5-pl曲线拟合，以最大化低浓度样品的准确性和精确性。然而，由于个别实验室条件的影响，所有模型在可检测范围的最低端和最高端的准确性和精确性都受到限制。因此，在解释分析物反应呈非线性时，应始终谨慎。  

不建议将样本浓度值外推到标准曲线范围之外。

典型标准曲线 

以下结果仅用于演示目的，不能替代通过检测获得的数据。每次检测运行和每块微孔板都必须进行标准曲线检测。  

大鼠胰岛素从ng/mL转换为?IU/mL（微国际单位）的换算公式：  

1 ng/mL = 24.8 ?IU/mL  

1 ?IU/mL = 6.945 pmol/L

文献参考：

1. Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。