Cell Biolabs pLenti-AAVR-Puro 载体：高效的慢病毒表达系统，助力基因研究

腺相关病毒（AAV）源自有缺陷的细小病毒，依赖其他病毒（如腺病毒和疱疹病毒）提供的必要辅助功能以实现高效的病毒复制和传播。AAV与任何已知疾病均无病因学关联，并已成功用于在多种组织中建立高效且长期的体内基因表达，且未引起显著的细胞免疫反应或毒性。AAV具有单链DNA基因组，长度约为4.7 kb。所有已鉴定的AAV血清型均具有三个关键特征，包括两份AAV末端重复序列（ITR）、一个rep区和一个cap区。

最近，通过全基因组筛选寻找AAV转导所必需的基因，发现I型跨膜蛋白KIAA0319L（现更名为AAV受体，AAVR）是多种AAV血清型进入代表性细胞类型以及在小鼠体内的关键受体（参考文献4）。AAVR具有一个跨膜区和一个短的C末端细胞质结构域，后者对于向反式高尔基网络的逆向运输是必需的。其外域（与AAV衣壳结合）包含五个串联的Ig样多囊肾病（PKD）结构域、一个MANEC结构域和一个N末端信号肽。

作为Cell Biolabs全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cell Biolabs热销产品pLenti-AAVR-Puro 载体。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

pLenti-AAVR-Puro 载体：

慢病毒生产

转染前一天：将足够数量的293T细胞或293LTV细胞（产品编号 LTV-100）铺板，使其在转染当天达到70-80%的汇合度。

转染细胞：使用磷酸钙或其他转染试剂进行转染。

注意：建议使用FuGENE?转染试剂（Roche Applied Science）或Lipofectamine? Plus（Invitrogen）进行转染。推荐质粒比例为3:1:1:1（pLenti-AAVR-Puro：pCMV-VSV-G：pRSV-REV：pCgpV）。

收集慢病毒上清：转染后36-72小时收集慢病毒上清。可在12小时间隔内收集2次或3次。收集期间需保存于4°C。

处理上清：将收集的上清合并，以1500 rpm离心5分钟去除细胞碎片，并通过0.22 ?m滤膜过滤。

保存上清：上清可直接使用，或根据需要进行纯化/浓缩。长期保存时，需将上清分装后保存于-80°C。

包装后注意事项

包装慢病毒只是确保基因成功表达的第一步。在感染宿主细胞之前，需要考虑以下步骤：

慢病毒的浓缩与纯化：由于慢病毒的潜伏特性，在感染宿主细胞之前，必须确保病毒高度浓缩。此外，病毒上清中的杂质可能会降低感染效率。

测定慢病毒滴度：这是确保病毒能够一致转导到宿主细胞的重要步骤。然而，qPCR或稳定克隆计数可能需要1-2周时间。传统的p24 ELISA试剂盒可能会大幅高估慢病毒滴度。我们的先进p24 ELISA试剂盒QuickTiter?慢病毒滴度试剂盒（产品编号 VPK-107）采用独家技术，可去除上清中的游离p24，从而提供更准确的慢病毒滴度。结果可在6-18小时内获得。

使用转导试剂提高感染效率：许多细胞难以被慢病毒有效感染，而缺乏辅助试剂时，转导效率可能会很低。虽然Polybrene?等试剂可以提供帮助，但往往仍不足够。Cell Biolabs的ViraDuctin?慢病毒转导试剂盒（产品编号 LTV-200）中的专有试剂可与病毒形成超复合物，通过促进病毒与细胞的相互作用，显著提高转导效率。

文献参考：

1. Auricchio, A., Hildinger, M., O'Connor, E., Gao, G. P. and Wilson, J. M. (2001) Hum Gene Ther 12:71–6.

2. Brument, N., Morenweiser, R., Blouin, V., Toublanc, E., Raimbaud, I. et al. (2002) Mol Ther 6:678–86.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Pillay S., Meyer N.L., Puschnik A.S., Davulcu O., Diep J., Ishikawa Y., Jae L.T., Wosen J.E.,Nagamine C.M., Chapman M.S., et al. (2016) Nature. 530, 108–112.

5. Dudek A.M., Pillay S., Puschnik A.S., Nagamine C.M., Cheng F., Qiu J., Carette J.E.,Vandenberghe L.H. (2018) J. Virol. 92, 2213-17.

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Cell Biolabs公司位于美国加利福尼亚州南部重要的工业城市圣迭戈（San Diego），是有名的细胞学试剂品牌，作为前沿的细胞学分析检测试剂盒生产商，为生物技术和研究类客户提供好的基于细胞功能研究以及疾病等方面的高端产品和技术服务。产品主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用Cell Biolabs的产品。