当暴露于激发光时,染料的荧光强度会因其光氧化或其他光反应而降低。很少有荧光染料能完全抵抗光漂白。通常,当一个部分在强激发光下反复扫描时,染料可能会在视觉评估或摄影完成之前失去明显的荧光信号。例如,荧光素(如FITC标记的抗体)的光漂白已成为荧光显微镜的一个主要问题。在严重的情况下(如藻胆蛋白标记的生物偶联物),由于极高的光漂白率,甚至无法拍摄高分辨率的荧光图像。Fluoroquest?防褪色试剂盒旨在降低染料的光漂白速率,为研究人员提供更长的观察时间。该套件包含所有可以轻松应用于成像实验的基本组件。它们都是预先混合好的即用型溶液。此套件专为微孔板格式设计,而#20001专为载玻片格式设计。
艾美捷FluoroQuest抗淬灭试剂盒II,适合微孔板成像:
货号:AAT-20003
单位大小:1 套件
H-短语:H303, H313, H333
危险符号:XN
预期用途:仅限研究使用(RUO)
R-短语:R20, R21, R22
激发:变化
发射:变化
推荐板:黑色壁,透明底
组分:
组分 A:抗褪色试剂 1 瓶
组分 B:测定缓冲液(4 °C) 1 瓶(10 mL)
协议概要:
准备样品(微孔板孔)
从板中移除液体
每个孔加入100 ?L/孔的抗褪色溶液
在显微镜下检查样本
库存溶液的准备:
除非另有说明,所有未使用的库存溶液应在制备后分成单次使用的小份,并储存在 -20 °C。避免反复冻融循环。
1. 抗褪色库存溶液:
将整个瓶的测定缓冲液(组分 B)加入到抗褪色试剂(组分 A)的瓶中。注意:当溶液变棕色时仍然可以使用,但当溶液变黑时请丢弃。
样品实验协议:
从您的96孔板中移除多余的液体。
在每个选定的孔中加入100 ?L的抗褪色溶液。
样品可以在应用抗褪色溶液后立即成像。图1显示了一个典型的图像。
为了使样品的寿命最优化,请将板储存在4°C的暗处。
图:U2OS细胞装载1?M钙黄绿素AM 1小时,在96孔Costar黑板上用2%甲醛固定30分钟。去除所有培养基后,向样品中加入抗褪色试剂(100?L/孔)。使用奥林巴斯荧光显微镜在0和30秒曝光时间比较FITC信号。所有图像都使用了相同的曝光设置。
FluoroQuest抗淬灭试剂盒II,适合微孔板成像文献参考:
On the mechanism of Trolox as antiblinking and antibleaching reagent
Authors: Cordes T, Vogelsang J, Tinnefeld P.
Journal: J Am Chem Soc (2009): 5018
Relationship between DAPI-fluorescence fading and nuclear DNA content: An alternative method to DNA quantification
Authors: Gallardo-Escarate C, Alvarez-Borrego J, Von Br and E, Dupre E, Del Rio-Portilla MA.
Journal: Biol Res (2007): 29
Strategies to improve photostabilities in ultrasensitive fluorescence spectroscopy
Authors: Widengren J, Chmyrov A, Eggeling C, Lofdahl PA, Seidel CA.
Journal: J Phys Chem A (2007): 429
The reliability of long-term storage of direct immunofluorescent staining slides at room temperature
Authors: Dikicioglu E, Meteoglu I, Okyay P, Culhaci N, Kacar F.
Journal: J Cutan Pathol (2003): 430
Comparative genomic hybridization technique
Authors: El-Rifai WE, Knuutila S.
Journal: Methods Mol Med (2001): 25
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