兔抗BRD4重组单克隆抗体，七平台全覆盖，批次一致性极高

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源重组单克隆抗体（货号：A700-004），特异性靶向人源BRD4蛋白（含溴结构域蛋白4）。克隆号BL-149-2H5，经细胞培养上清纯化，以完整IgG形式提供，适用于染色质免疫沉淀（ChIP）、流式细胞术（Flow Cyt）、免疫细胞化学（ICC）、免疫荧光（ICC-IF）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）实验，可识别小鼠及人类样本中的BRD4蛋白。本品浓度为100 ?g/ml，为转录调控和表观遗传学研究提供了高特异性、高批次一致性的检测工具。

靶点背景：BRD4的染色质适配子功能与转录调控

BRD4（Bromodomain-containing protein 4）是含溴结构域蛋白家族的成员之一，作为染色质适配子和转录共因子，在基因转录调控中发挥核心作用。

结构与功能特征：

含有两个溴结构域（bromo-domains），可特异性识别并结合组蛋白上乙酰化的赖氨酸残基

最初被鉴定为MCAP（mitotic chromosome associated protein），在有丝分裂染色体上持续结合

与多个转录复合物相互作用，包括Mediator复合物和P-TEFb复合物

通过募集P-TEFb（正向转录延伸因子b）促进RNA聚合酶II的转录延伸

生物学功能：

结合乙酰化染色质，作为表观遗传信号的解读器

调控多种基因的转录延伸，尤其参与细胞周期、炎症和致癌基因的表达

在多种癌症（如急性髓系白血病、乳腺癌、多发性骨髓瘤）中异常活化，已成为重要的抗肿瘤药物靶点（如BET抑制剂）

别名： CAP、HUNK1、HUNKI、MCAP、chromosome-associated protein、Protein HUNK1

抗体特性规格

参数 规格

靶点 BRD4

宿主 兔

克隆性 重组单克隆

克隆号 BL-149-2H5

形式 完整IgG

同种型 IgG

偶联物 非偶联

纯度 纯化（细胞培养上清）

浓度 100 ?g/ml

抗原物种 人

反应性 小鼠、人

免疫原信息：

抗体识别的表位位于人BRD4蛋白C末端区域。具体对应NCBI条目NP_490597.1编号中的第1312-1362位氨基酸（GeneID 23476）。该C末端表位的选择有助于识别全长BRD4蛋白，并可能避免与BRD2、BRD3等其他含溴结构域蛋白的交叉反应。

储存与稳定性

储存温度：2-8°C（请勿冷冻）

有效期：自收货之日起1年

缓冲液：磷酸盐缓冲液（PBS），含0.1% BSA及0.09%叠氮钠

> 注意：叠氮钠作为防腐剂，如需进行细胞培养或体内注射实验，应通过透析或超滤去除。本品为重组单克隆抗体，批次间一致性高，可长期稳定保存。

应用方法与实验条件

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释度：1:1000

通用流程要点：

封闭液及抗体稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：过夜（4°C）

二抗选择：

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物WB：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020），以避免IgG重链信号干扰

预期条带：BRD4有多个亚型，主要亚型分子量约为150 kDa（长亚型）和约80 kDa（短亚型，缺乏C末端）。

免疫沉淀（IP）

使用剂量：20 ?l抗体/mg细胞裂解液

操作说明：按每毫克细胞裂解液加入20 ?l本品（含2 ?g抗体，因浓度100 ?g/ml，20 ?l含2 ?g）。该用量相对常规IP抗体（6 ?g/mg）略低，但经重组单克隆优化，仍可高效捕获目标蛋白。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:100 - 1:500

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。

免疫细胞化学（ICC）

推荐稀释度：1:100 - 1:500

FFPE细胞切片处理：建议使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行抗原修复。

免疫细胞化学/免疫荧光（ICC-IF）

推荐稀释度：1:25 - 1:250

固定与透化建议：

固定：推荐使用甲醛（4%）固定

透化：对于甲醛固定的细胞，推荐使用Triton X-100进行透化处理

流式细胞术（Flow Cyt）

使用剂量：1 ?l/1×10?个细胞

固定与透化流程：

固定：4%甲醛

透化：90%甲醇

注意：甲醇透化条件与常规Triton X-100不同，请严格按照上述条件操作以确保抗原可及性。

染色质免疫沉淀测序（ChIP-Seq）

使用剂量：10-40 ?l/30 ?g染色质

批次说明：此前批次已通过ChIP-Seq验证合格。由于本品为重组单克隆抗体，批次间一致性高，后续批次预期性能稳定。

操作建议：

使用10-40 ?l抗体与30 ?g片段化染色质孵育（建议从20 ?l开始优化）

参考标准ChIP-Seq流程进行洗涤、洗脱和DNA纯化

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山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）——用于细胞裂解液WB检测

抗兔IgG轻链HRP偶联抗体——用于免疫沉淀物WB检测，有效避免重链干扰

正常猪血清（S100-020）——用于IP-WB封闭液添加（5%），降低非特异性背景

荧光标记抗兔二抗——用于ICC-IF和流式细胞术检测（如Alexa Fluor 488/555/647偶联物）

蛋白A/G磁珠——用于ChIP和IP实验中的抗体捕获

本品为重组单克隆抗体，以高特异性、高批次一致性和7种应用平台兼容性为核心优势，尤其适合需要跨技术路线验证BRD4功能的研究项目。建议使用者针对各应用按照推荐的起始条件进行预实验优化，并注意区分BRD4长/短亚型的表达特征。对于ChIP-Seq和流式等对抗体性能要求较高的应用，可直接参考此前已发表的批次验证数据。