兔抗RNF2亲和纯化抗体，精准识别PRC核心组分，IP高效富集

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗体（货号：A302-869A），特异性靶向人源RNF2蛋白（Ring Finger Protein 2，又称RING1B、BAP-1）。该抗体经抗原亲和纯化，以完整IgG形式提供，适用于染色质免疫沉淀测序（ChIP-Seq）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）实验，可识别人源RNF2蛋白。本品浓度为1000 ?g/ml，为表观遗传学和泛素化研究提供了高灵敏度的检测工具。

靶点背景：RNF2的多聚梳家族功能与E3泛素连接酶活性

RNF2（Ring finger protein 2）是多聚梳家族（Polycomb group, PcG）的核心蛋白成员，在转录抑制、染色质修饰和早期发育中发挥关键作用。

结构与功能特征：

含有一个特征性的RING finger结构域，赋予E3泛素连接酶活性

作为PRC1复合物（Polycomb repressive complex 1）的核心组分，催化组蛋白H2A第119位赖氨酸（H2AK119ub）的单泛素化修饰

通过与泛素结合酶HIP2（huntingtin interacting protein 2）相互作用，介导底物蛋白的泛素化降解

生物学功能：

与转录因子CP2（TFCP2/CP2）相互作用并抑制其活性

参与小鼠前后轴的特化以及早期发育中的细胞增殖调控

维持基因沉默状态，在干细胞分化、X染色体失活和癌症发生中发挥作用

别名： BAP-1、DING、HIPI3、RING1B、RING2、huntingtin-interacting protein 2-interacting protein 3、protein DinG等

抗体特性规格

参数 规格

靶点 RNF2 (RING1B)

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

同种型 IgG

偶联物 非偶联

纯度 抗原亲和纯化

浓度 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

抗原物种 人

反应性 人（经验证）

储存与稳定性

储存温度：2-8°C（请勿冷冻）

有效期：自收货之日起1年

缓冲液：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮钠

> 注意：本品浓度高达1000 ?g/ml，使用前可根据实验需要稀释至工作浓度。叠氮钠作为防腐剂，进行ChIP-Seq或HRP检测时需注意去除。

应用方法与实验条件

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释度：1:2000 - 1:10,000

通用流程要点：

封闭液及抗体稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：过夜（4°C）

二抗选择：

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物WB：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020），以避免IgG重链信号干扰（约55 kDa）

预期条带：RNF2分子量约为38-42 kDa（实际迁移可能因修饰略有差异）。

免疫沉淀（IP）

使用剂量：6 ?g抗体/mg细胞裂解液

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:500 - 1:2000

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。

染色质免疫沉淀测序（ChIP-Seq）

使用剂量：10 ?g抗体/实验（参考Ram O et al., Cell. 2011 Dec 23;147(7):1628-39）

操作建议：

按照已发表的ChIP-Seq流程进行染色质片段化（超声或酶切）

使用10 ?g抗体与染色质孵育过夜

推荐设置阴性对照（正常兔IgG）和阳性对照（如H3K27me3抗体）

洗脱后的DNA进行建库和测序

> 注：该抗体已成功应用于ChIP-Seq实验，文献中提供了标准化的实验参数。

应用注意事项

1. 超高浓度母液（1000 ?g/ml）：本抗体提供浓度显著高于常规产品（通常200 ?g/ml）。WB使用时建议至少稀释2000倍（终浓度0.5 ?g/ml），高表达样本可稀释至10,000倍（0.1 ?g/ml），大幅节约抗体用量。IHC从1:500开始优化，ChIP-Seq按10 ?g/次使用，可根据实验规模提前分装。

2. ChIP-Seq专用验证：本品已在Cell期刊发表的ChIP-Seq研究中得到应用（10 ?g/反应）。这是本抗体的核心功能优势，可直接参考文献中的实验条件，减少摸索时间。

3. 多平台兼容性：经验证可用于ChIP、IHC、IP和WB四种应用。IHC推荐稀释范围1:500-1:2000，建议从1:500开始预实验，根据信号强度和背景调整。抗原修复务必使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0），若信号弱可尝试EDTA（pH 8.0），但优先柠檬酸。

4. IP实验优化：按6 ?g/mg裂解液用量加入抗体，建议设置正常兔IgG作为阴性对照。由于RNF2是PRC1复合物核心组分，IP后可通过WB检测其他PRC1成员（如BMI1、RING1A）验证复合物完整性。使用Protein A/G琼脂糖珠捕获时，注意洗涤充分以降低非特异性背景。

5. WB稀释范围宽：1:2000-1:10,000。RNF2在多种细胞系（如HeLa、HEK293、MCF-7）中均有表达，建议从中高稀释度（1:5000）开始。若检测内源低表达水平，可降低稀释度至1:2000。使用化学发光检测时，曝光时间可根据信号强度调整。

6. 储存与取用：2-8°C恒温保存，避免反复开启和温度波动。本品浓度高，无需分装，按需吸取即可。请勿冷冻，冷冻会导致抗体聚集和活性下降，尤其影响ChIP-Seq性能。

7. 叠氮钠对HRP及ChIP-Seq的影响：

HRP检测：叠氮钠不可逆抑制辣根过氧化物酶活性。WB实验中，通过充分洗涤（3次×5分钟）可有效去除；IHC实验中，抗原修复步骤本身可稀释去除叠氮钠。

ChIP-Seq：叠氮钠可能影响染色质免疫沉淀效率，建议在抗体稀释和孵育缓冲液中避免额外添加叠氮钠。原缓冲液中的0.09%叠氮钠在10 ?g抗体总量中浓度极低（约0.09%×10 ?l?实际抗体体积为10 ?l/1000 ?g? 需要计算：1000 ?g/ml，10 ?g为10 ?l，叠氮钠含量约9 ?g，在ChIP反应体系（通常500 ?l-1 ml）中被充分稀释至0.0009%-0.0018%，通常不影响。但若担心可透析去除。

8. ChIP-Seq实验中的对照设置：建议同时进行Input DNA和阴性IgG对照。使用本抗体获得的富集区域应与已知PRC1靶基因（如HOX基因簇）进行比对验证。

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