羊抗犬IgG2重链抗体HRP偶联物，适用于疫苗效价评估与免疫分型研究

一、产品概述

由艾美捷推出的羊抗犬IgG2重链抗体HRP偶联物（货号：A40121P）是一款以绵羊为宿主来源、针对狗IgG2重链的特异性多克隆抗体。该抗体采用固相吸附及亲和层析工艺纯化，确保亚类特异性，并与辣根过氧化物酶（HRP）共价偶联，酶与抗体的摩尔比为4:1。抗体以完整IgG形式提供，浓度为1 mg/ml，可直接用于酶联免疫吸附测定、免疫细胞化学、免疫组化及免疫印迹等检测系统，无需自行标记。

二、靶点信息：狗IgG2重链

IgG是犬类血清中主要的免疫球蛋白亚类，其中IgG2是仅次于IgG1的第二大亚类。IgG2的生物学特点包括：

胎盘转运能力弱：不易通过胎盘屏障，对新生幼犬的被动免疫贡献较小

Fc受体结合能力强：可有效结合免疫细胞表面的Fc受体，参与抗体依赖的细胞介导的细胞毒性及调理吞噬作用

半衰期差异：相较于IgG3（半衰期较短），IgG2的血清半衰期更长，在免疫应答中发挥持久作用

本抗体特异性识别狗IgG2的重链（Heavy Chain），不识别轻链或其他非免疫球蛋白血清蛋白，确保在检测体系中对IgG2亚类的精准识别。

三、产品规格与储存

参数 | 详情

靶点 | 狗IgG2重链

反应性 | 狗

宿主 | 绵羊

克隆性 | 多克隆

形态 | 全IgG

亚型 | IgG

偶联物 |HRP（辣根过氧化物酶）

纯度 | 抗原亲和纯化 + 固相吸附去除交叉反应

抗原种属 | 狗

浓度 |1 mg/ml

缓冲液 | 含0.2% BSA及0.05% ProClean 400的磷酸盐缓冲液

储存条件 | 2–8°C

有效期 | 自收货起1年

浓度测定：偶联前采用比尔定律测定免疫球蛋白浓度，其中1 mg/ml IgG在280 nm的吸光度为1.4。

防腐剂说明：ProClean 400是一种广谱防腐剂，可替代叠氮钠（叠氮钠会抑制HRP活性），因此本抗体可直接用于HRP检测系统，无需透析去除防腐剂。

四、生产与纯化工艺

1.固相吸附：抗血清经固相吸附处理，去除与免疫球蛋白轻链及其他血清蛋白反应的抗体，确保亚类特异性。

2.亲和层析：采用偶联狗IgG2抗原的琼脂糖珠进行亲和纯化，仅保留特异性识别IgG2重链的抗体。

3.HRP标记：纯化后的抗体与HRP共价偶联，酶/抗体摩尔比为4:1，保证高标记效率和检测灵敏度。

特异性验证：经免疫电泳及ELISA验证，本抗体特异性识别狗IgG2，不识别免疫球蛋白轻链及非免疫球蛋白血清蛋白。可能与其他物种的IgG2发生交叉反应（详见后述）。

五、应用与推荐稀释度

重要说明：未对列出的所有应用进行实验室逐一验证，以下稀释度范围基于经验及文献推荐，用户需自行优化。

应用 | 推荐稀释度 | 备注

ELISA | 1:10,000 – 1:100,000 | 用于检测板结合的狗IgG2

免疫细胞化学 | 1:200 – 1:2,000 | 适用于细胞涂片或爬片

免疫组化（组织切片） | 1:200 – 1:2,000 | 适用于石蜡或冷冻切片

免疫印迹 | 1:2,000 – 1:20,000 | 用于还原或非还原条件下检测IgG2重链

通用操作建议：

抗体稀释液：推荐使用含1% BSA或5%脱脂牛奶的PBS或TBS

孵育条件：室温1–2小时或4°C过夜

检测：HRP底物推荐TMB（ELISA）、DAB或AEC（IHC/ICC）、ECL（WB）

应用优化建议：

ELISA：

包被：使用纯化狗IgG2或含IgG2的血清/腹水，4°C过夜包被

封闭：推荐使用1% BSA或5%脱脂牛奶的PBS，室温1小时

一抗（本抗体）稀释：从1:10,000开始，进行倍比稀释确定最佳工作浓度

显色：加入TMB底物，显色10–30分钟，2M H?SO?终止，读取OD???

免疫印迹：

样本制备：推荐使用非还原上样缓冲液（不含β巯基乙醇或DTT），因还原条件会破坏重链与轻链间的二硫键，导致重链迁移至约55 kDa位置；非还原条件下IgG分子量约150 kDa，重链仍保留在复合物中

膜封闭：5%脱脂牛奶的TBST，室温1小时

抗体稀释：1:2,000–1:20,000，室温孵育1–2小时

洗涤：TBST洗涤3×5分钟

检测：ECL化学发光法

免疫组化/免疫细胞化学：

固定：推荐4%多聚甲醛（室温10–20分钟）

通透：0.1–0.25% Triton X100（仅细胞内染色需要；检测细胞表面IgG则无需通透）

封闭：5%正常兔血清或山羊血清（与二抗宿主匹配）+ 1% BSA，室温30分钟

一抗孵育：1:200–1:2,000，4°C过夜或室温2小时

检测：DAB或AEC显色，复染苏木精（DAB）或甲基绿（AEC）