兔抗UTX抗体亲和纯化，聚焦表观遗传与发育调控

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体（货号：A302-374A），特异性靶向UTX蛋白（又称KDM6A，赖氨酸特异性去甲基化酶6A）的内部区域（第725至775位氨基酸之间）。UTX是一种含JmjC结构域和TPR重复序列的组蛋白去甲基化酶，特异性催化组蛋白H3第27位赖氨酸（H3K27）的二甲基化和三甲基化去除，从而激活基因转录，在胚胎后部发育和HOX基因表达调控中发挥关键作用。该抗体经抗原亲和纯化，未偶联标记，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB），且与人、小鼠样本有交叉反应性。以下将从基本参数、免疫原信息、应用条件、储存稳定性及生物学背景等方面进行详细说明。

一、关键规格参数

项目 | 详细内容

靶标 | UTX / KDM6A (Lysine Demethylase 6A)

反应种属 | 小鼠、人类

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗体形式 | 完整IgG

免疫原 | 对应人UTX蛋白第725至775位氨基酸之间的表位（参考序列NP_066963.1，GeneID 7403）

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯化方式 | 抗原亲和纯化（使用固定化的UTX特异性表位）

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/mL

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7~8，含0.09%叠氮钠

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

生产流程 | 亲和纯化后，通过Beer定律测定IgG浓度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值为1.4）

> 注：0.09%叠氮钠作为防腐剂，在IP后WB使用HRP标记二抗时需注意其抑制作用。建议在IP洗脱或二抗孵育前充分去除叠氮钠。

二、免疫原与特异性

本抗体的表位定位于人UTX蛋白的内部区域（第725至775位氨基酸），该区域位于TPR重复序列与JmjC结构域之间。通过固相载体上固定的特异性表位进行亲和纯化，确保抗体识别天然及变性的UTX。经内部验证，该抗体可检测人源和小鼠源UTX，且不与其同源蛋白UTY（由Y染色体编码，在男性中表达）发生显著交叉反应（取决于序列保守性）。实际实验中建议以阳性对照（如HEK293或HeLa细胞裂解液）确认信号。UTX分子量约为154 kDa，在WB中呈现为清晰的高分子量条带。

三、推荐应用与实验条件

以下稀释度均为起始推荐范围，用户需根据具体实验体系进行优化。

1. 免疫印迹（Western Blot, WB）

稀释度：1:10,000 – 1:25,000（超高稀释比，显著节约抗体用量）  

封闭液及抗体稀释液：5%脱脂奶粉-TBST（Tris缓冲盐水+0.1% Tween-20）  

孵育条件：一抗4°C孵育过夜（推荐）  

二抗推荐：  

常规细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体，如货号A120-101P。  

免疫沉淀后WB：为避免变性IP产物中重链（~55 kDa）信号干扰，推荐使用抗兔IgG轻链特异性HRP标记二抗，并在封闭液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景。  

阳性对照：HEK293、HeLa或小鼠胚胎成纤维细胞裂解液。UTX分子量较大（~154 kDa），建议使用6-8% SDS-PAGE凝胶和PVDF膜（0.45 μm孔径），转膜采用湿转法（100V，2小时或30V过夜）。

2. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗体 / mg总蛋白裂解液  

操作建议：  

裂解液推荐使用非变性裂解缓冲液（如NP-40或RIPA缓冲液，但避免SDS），以维持UTX与复合物（如COMPASS样复合物）的相互作用。  

孵育条件：4°C旋转孵育2小时或过夜。  

使用Protein A/G琼脂糖或磁珠捕获免疫复合物。  

洗脱后通过WB检测，务必使用抗兔IgG轻链特异性二抗以避免重链干扰。  

阳性对照：过表达UTX的细胞裂解液或内源性表达较高的细胞（如HEK293、HeLa）。

> 注：本产品未验证用于IHC或ICC-IF，用户需自行探索。

四、产品特性与质量控制

纯化工艺：采用表位特异性亲和纯化，较常规蛋白A/G纯化具有更高的特异性，显著降低非特异性背景。免疫原选择在保守的TPR和JmjC之间的独特区域，有助于区分UTX与其他JmjC家族成员（如JMJD3/KDM6B）。  

浓度与效价：浓度高达1000 ?g/mL，WB推荐稀释比达1:10,000~1:25,000，每微升抗体可制备10-25 mL工作液，经济性极佳，尤其适合高通量筛选或长期项目。  

功能验证：每批抗体均通过WB检测多种细胞裂解液中的内源性UTX（~154 kDa），确认单一条带位置正确。同时通过IP验证其捕获内源性UTX及相互作用蛋白的能力。  

批次间一致性：生产记录完整，遵循内部QC标准，符合ISO 9001质量管理体系（母公司Fortis Life Sciences）。  

优势总结：  

WB超高稀释比（1:25,000） → 单次实验成本极低  

IP用量明确（6 ?g/mg裂解液） → 减少优化时间  

轻链专用二抗配套方案 → IP-WB无重链干扰  

长效稳定储存（2-8°C） → 即用型方便  

五、储存与稳定性

储存温度：2–8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体变性、效价下降。  

运输条件：湿冰运输，收货后请立即按上述温度保存。  

分装建议：若需长期使用，建议分装成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀释后长期储存。  

有效期：自收货之日起1年。过期产品可能信号减弱，建议重新订购。  

六、生物学背景：UTX的功能与研究价值

UTX（KDM6A）是一种依赖JmjC结构域的组蛋白去甲基化酶，特异性去除组蛋白H3第27位赖氨酸的二甲基化（H3K27me2）和三甲基化（H3K27me3），但对单甲基化（H3K27me1）无活性。H3K27me3是多梳抑制复合物（PRC2）沉积的抑制性组蛋白标记，UTX通过去除该标记激活基因转录。UTX的主要功能与研究领域包括：

发育调控：UTX是后部发育的关键调节因子，通过调控HOX基因簇的表达影响体节分化和肢体形成。  

表观遗传与转录激活：UTX作为COMPASS样复合物的核心组分，促进H3K4甲基化（活性标记）与H3K27去甲基化的协同作用，激活靶基因。  

肿瘤抑制与癌症：UTX在多种癌症（如膀胱癌、肾癌、多发性骨髓瘤）中发生功能缺失突变，作为肿瘤抑制因子发挥作用。KABUKI综合征2型（Kabuki syndrome type 2）即由KDM6A突变引起。  

性别特异性生物学：UTX由X染色体编码，在女性中可能逃脱X失活，其同源基因UTY位于Y染色体，两者功能部分冗余但存在差异。  

免疫与炎症：UTX调控Th1和Th17细胞分化，影响自身免疫疾病进程。

典型研究领域：  

表观遗传学与染色质调控  

发育生物学（HOX基因、体节形成）  

癌症生物学（肿瘤抑制、耐药性）  

X染色体失活与性别差异  

免疫细胞分化与功能