兔抗G3BP2抗体亲和纯化：从应激颗粒组装到NF-κB核质穿梭

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的 G3BP2抗体（货号A302-040A）是一款针对人源Ras-GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白2（G3BP2）的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，以未偶联完整IgG形式提供。该抗体特异性识别人源G3BP2蛋白，适用于免疫印迹及免疫沉淀检测，为下游Ras信号通路、RNA代谢、应激颗粒组装及NF-κB核质穿梭调控研究提供高灵敏度工具。

核心规格参数

参数 详细信息

靶标 G3BP2（GTP酶激活蛋白SH3结构域结合蛋白2）

反应性 人类

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第275–325位氨基酸区域

抗体形式 完整IgG

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人类

浓度 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8 °C

保质期 到货后1年

突出优势：抗体浓度为1000 ?g/ml，远超常规抗体水平。结合超宽的WB推荐稀释范围（1:10,000–1:25,000），单次采购可支持数千次检测，大幅降低单位实验成本。

免疫原与特异性验证

A302-040A抗体采用固相载体上固定的G3BP2特异性表位进行亲和纯化。该抗体识别的表位位于人G3BP2蛋白的第275至325位氨基酸之间（参考编号NP_036429.2，GeneID 9908）。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/mL IgG在A280波长处的吸光度为1.4。

特异性验证要点：

免疫原区域位于蛋白中间区域（275–325 aa），该区域在G3BP2与高度同源的家族成员G3BP1之间存在序列差异，有助于实现特异性识别

G3BP2含有RNA识别基序（RRM）和NTF2样结构域。抗体经抗原亲和纯化，可有效避免与G3BP1及其他含RRM结构域蛋白的交叉反应

建议使用G3BP2敲除细胞裂解液（如CRISPR/Cas9构建的G3BP2 KO细胞）作为阴性对照

应用方法与推荐工作浓度

免疫印迹（WB）

推荐稀释范围：1:10,000 – 1:25,000（极宽范围）

实验方案要点：

封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST

一抗孵育条件：4°C孵育过夜（推荐）

细胞裂解液检测：使用山羊抗兔IgG重链+轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗

免疫沉淀物检测：使用兔IgG轻链特异性HRP二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景

> 功能性提示：由于抗体浓度高达1000 ?g/ml且亲和力高，即使稀释至1:25,000仍可获得强信号。对于常规表达水平的细胞裂解液（如HeLa、HEK293），推荐从1:10,000起始；对于高表达样本或需极低背景的实验，可尝试1:20,000–1:25,000。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物

操作注意事项：

裂解缓冲液推荐使用非变性裂解液（如含150–200 mM NaCl、0.5–1% NP-40的Tris缓冲液，pH 7.4），以维持G3BP2与应激颗粒组分及NF-κB复合物的相互作用

裂解液中必须添加蛋白酶抑制剂（PMSF、蛋白酶抑制剂混合物），若研究应激颗粒动态，可添加RNase抑制剂（可选，取决于实验目标）

抗体与裂解物共孵育：4°C旋转孵育2小时至过夜

使用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物

洗脱后建议使用轻链特异性二抗进行WB检测，避免重链信号干扰

复合物共沉淀：G3BP2是应激颗粒的核心组分，可与G3BP1形成异源二聚体，并与IκBα及NF-κB复合物相互作用。通过IP-G3BP2，可检测应激颗粒相关蛋白（如G3BP1、TIA1、Caprin1）的共沉淀，或分析NF-κB信号通路的调控复合物。

别名 G3BP-2; GAP SH3 domain-binding protein 2; 核转运因子2样结构域蛋白

储存与稳定性指南

储存温度：2–8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致蛋白聚集及活性下降。

防腐剂：0.09%叠氮化钠，可抑制微生物生长。若用于某些功能性实验（如活细胞成像），需透析去除。

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，确保长期稳定性。

有效期：自到货之日起1年。建议在瓶身标注收到日期，分装成小份（如10–20 ?l）储存于2–8°C，以减少反复开管带来的污染及活性损失。

应用场景推荐

1. 应激颗粒动态分析：通过IP-WB检测应激条件下G3BP2与核心应激颗粒蛋白（G3BP1、TIA1、Caprin1）的共沉淀变化，验证应激颗粒组装完整性和药物干预效果。

2. Ras信号通路研究：在Ras突变的肿瘤细胞系中，敲低G3BP2后通过WB检测下游效应分子（如p-ERK）的变化，评估G3BP2在Ras驱动的增殖中的作用。

3. NF-κB核质穿梭机制：使用IP检测G3BP2与IκBα/NF-κB复合物的结合，结合细胞分级分离实验分析TNF-α刺激后NF-κB p65的核定位变化。

4. 病毒感染模型：在病毒（如SARS-CoV-2、流感病毒）感染的细胞中，通过WB检测G3BP2的表达水平及应激颗粒形成，研究病毒逃逸宿主RNA granule通路的机制。