兔抗JARID1B抗体亲和纯化，WB稀释比高达1:10000，极致节约抗体用量

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗体（货号：A301-813A），特异性靶向人源JARID1B蛋白（又称KDM5B，赖氨酸特异性去甲基化酶5B）。该抗体经抗原亲和纯化，以完整IgG形式提供，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）实验，特异性识别人源JARID1B蛋白。

靶点背景：JARID1B / KDM5B的生物学功能

JARID1B（Jumonji AT富集相互作用结构域1B）是JARID1家族成员之一。该家族包括JARID1A、JARID1B、JARID1C和JARID1D，均为组蛋白赖氨酸去甲基化酶，通过催化组蛋白H3第4位赖氨酸（H3K4）的去甲基化发挥转录抑制功能。

蛋白结构与功能特征：

含有一个Jumonji C（JmjC）结构域和一个Jumonji N（JmjN）结构域——负责去甲基化酶活性

含有一个ARID（AT富集相互作用结构域）——参与DNA结合

含有三个PHD型锌指结构域——介导蛋白-蛋白相互作用

组织表达与疾病关联：

JARID1B的表达主要局限于睾丸组织

在前列腺癌和乳腺癌中表达上调，提示其在肿瘤发生中发挥关键作用

作为转录抑制因子，参与细胞增殖、分化和干性维持

别名：CT31、PLU1、PLU-1、PUT1、MRT65、PPP1R98、RBBP2H1A、RBP2-H1、cancer/testis antigen 31等

抗体特性规格

参数 规格

靶点 JARID1B (KDM5B)

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

同种型 IgG

偶联物 非偶联

纯度 抗原亲和纯化

浓度 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

抗原物种 人

反应性 人（经验证）

免疫原信息：

抗体识别的表位位于人JARID1B蛋白第1494位氨基酸至C末端之间。具体区域对应NCBI条目NP_006609.3编号中的第1494-1544位氨基酸。

储存与稳定性

储存温度：2-8°C（请勿冷冻）

有效期：自收货之日起1年

缓冲液：Tris-柠檬酸-磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮钠

> 注意：本抗体浓度高达1000 ?g/ml，使用前可根据实验需要稀释至工作浓度。叠氮钠作为防腐剂，如需进行活细胞实验或体内注射，应通过透析或超滤去除。

应用方法与实验条件

蛋白质印迹（WB）

推荐稀释度：1:2000 - 1:10,000

通用流程要点：

封闭液及抗体稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：过夜

二抗选择：

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物WB：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020），以消除重链干扰

免疫沉淀（IP）

使用剂量：6 ?g抗体/mg细胞裂解液

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:500 - 1:2000（较宽范围，便于优化）

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。

适用样本：经验证可检测人组织及细胞中的JARID1B表达。

生产与质控

纯化工艺：使用固相载体固定的JARID1B特异性表位进行亲和纯化，确保抗体对目标区域的专一性识别。

浓度测定：基于比尔定律，以1 mg/ml IgG在A280波长下吸光度为1.4作为计算基准。

应用注意事项

1. 高浓度母液：本抗体提供浓度为1000 ?g/ml，远高于常规产品（通常200 ?g/ml）。使用WB时建议至少稀释2000倍（终浓度0.5 ?g/ml），高丰度样本可稀释至10,000倍（0.1 ?g/ml），有效节约抗体用量。

2. 多平台验证：本品经验证可用于IHC、IP和WB三种应用。IHC稀释范围1:500-1:2000，建议从1:500开始进行预实验，根据信号强度和背景调整。

3. IHC抗原修复：使用FFPE切片时，务必进行柠檬酸缓冲液（pH 6.0）热修复。若信号较弱，可尝试EDTA修复（pH 8.0），但优先推荐柠檬酸。

4. IP实验：按6 ?g/mg裂解液用量加入抗体，建议设置正常兔IgG作为阴性对照。使用Protein A/G琼脂糖珠捕获复合物。由于JARID1B分子量较大（约180 kDa），WB检测时建议使用合适浓度的分离胶（6-8%）。

5. WB稀释范围：1:2000-1:10,000较宽，建议根据细胞系中JARID1B的内源表达水平进行优化。已知JARID1B在多种肿瘤细胞系（如乳腺癌、前列腺癌细胞）中高表达，可优先使用阳性对照裂解液。

6. 储存期间：2-8°C恒温保存，避免反复温度波动。本品浓度高，不建议反复冻融，可分装后短期保存，但尽量避免冷冻。

7. 叠氮钠影响：叠氮钠会抑制HRP活性。如使用HRP偶联二抗进行WB或IHC检测，务必在孵育二抗前通过充分洗涤去除叠氮钠。

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山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）——用于细胞裂解液WB检测

抗兔IgG轻链HRP偶联抗体——用于免疫沉淀物WB检测，有效避免重链干扰（约55 kDa）

正常猪血清（S100-020）——用于IP-WB封闭液添加，降低非特异性背景

研究应用场景

本抗体适用于以下研究方向：

表观遗传调控研究：检测JARID1B介导的H3K4去甲基化在基因转录抑制中的作用

肿瘤生物学：分析JARID1B在前列腺癌、乳腺癌及其他实体瘤中的表达上调机制

免疫组织化学定位：在组织切片中定位JARID1B的表达分布（尤其在睾丸组织和肿瘤样本中）

蛋白相互作用：通过IP联合质谱鉴定JARID1B的相互作用蛋白及复合物组成

发育与干细胞：研究JARID1B在细胞干性维持及分化中的功能