兔抗NIPBL抗体亲和纯化，有效富集染色质结合蛋白，助力染色体凝聚研究

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的NIPBL抗体（货号A301-779A）是一款针对人NIPBL（Nipped-B-like，亦称delangin）的兔源多克隆抗体，由美国制造，采用抗原亲和纯化工艺制备。该抗体以未偶联的完整IgG形式提供，浓度为1000 ?g/ml，适用于免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）两种应用，是研究姐妹染色单体粘连、染色体凝聚及Cornelia de Lange综合征（CdLS）的重要工具。

二、技术规格

参数 | 详细信息

靶标 | NIPBL（Nipped-B-like）

反应性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | 完整IgG

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

保存条件 | 2-8°C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠

三、免疫原与纯化工艺

该抗体识别的表位位于人NIPBL蛋白第1025至1075位氨基酸残基之间（编号参考NP_597677.2，GeneID 25836）。该区域位于NIPBL蛋白的中间部分，远离其N端的HEAT重复结构域和C端的Scc2相关区域。

纯化方式：使用固相载体上固定的NIPBL特异性表位进行抗原亲和纯化

浓度测定：通过比尔定律测定，1 mg/mL IgG在280 nm波长下的吸光度为1.4

四、产品背景

NIPBL基因与Cornelia de Lange综合征

NIPBL基因最初被鉴定为Cornelia de Lange综合征（CdLS）的致病基因。CdLS是一种异质性发育障碍，表现为多发性解剖畸形，包括特殊面容、生长迟缓、上肢缺陷、智力障碍及多器官系统异常。NIPBL基因突变是CdLS最常见的遗传病因，约占临床确诊患者的50-60%。

分子功能

NIPBL蛋白产物也称为delangin，与黑腹果蝇的Nipped-B蛋白具有高度同源性。Nipped-B属于染色体黏合蛋白家族，在姐妹染色单体粘连、染色体凝聚和DNA修复中发挥关键作用。NIPBL作为粘连蛋白复合物的加载因子（cohesin loading factor），与MAU2形成复合物，负责将粘连蛋白复合物装载到染色质上，从而介导姐妹染色单体的粘连。

五、临床关联研究

对NIPBL突变阳性与阴性个体的中期分裂相进行研究发现，NIPBL突变与早熟姐妹染色单体分离现象相关。这一结果表明NIPBL在人类中的功能与其果蝇同源物相似，即参与调控染色体的正确分离和粘连。

蛋白特征

NIPBL蛋白分子量巨大，约316 kDa，包含多个HEAT重复序列，这些重复序列介导蛋白-蛋白相互作用，特别是与粘连蛋白复合物亚基（如SMC1A、SMC3）的结合。

六、应用方法与实验条件

免疫印迹（WB）

推荐稀释比：1:10,000 - 1:25,000

凝胶推荐：3-8% Tris-乙酸酯凝胶（因NIPBL分子量约316 kDa，常规SDS-PAGE无法有效分离大分子蛋白）

封闭与稀释液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育：过夜孵育

细胞裂解物检测：使用山羊抗兔IgG重轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物检测：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）

预期分子量：NIPBL蛋白约316 kDa。在WB中应观察到接近该分子量的条带。由于蛋白分子量极大，转膜条件需特别优化。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g抗体 / mg裂解物

七、储存与稳定性

存放于2-8°C，严禁冷冻。反复冻融会导致抗体聚集和活性丧失

抗体在叠氮化钠存在下可稳定保存1年

取用时应使用无菌吸头，避免微生物污染

八、研究应用场景

基于NIPBL的生物学功能，该抗体可应用于以下研究方向：

1. Cornelia de Lange综合征机制研究：检测CdLS患者细胞中NIPBL蛋白的表达水平及突变影响

2. 姐妹染色单体粘连调控：通过IP研究NIPBL与粘连蛋白复合物（cohesin）的相互作用

3. 染色体凝聚与DNA修复：分析NIPBL在有丝分裂及DNA损伤应答中的功能

4. 转录调控：NIPBL/cohesin复合物也参与远距离增强子-启动子相互作用，可结合ChIP-seq研究其染色质结合谱

NIPBL作为Cornelia de Lange综合征的关键致病蛋白和粘连蛋白加载因子，在染色体粘连、DNA修复及转录调控中发挥核心作用。该抗体可广泛应用于发育生物学、表观遗传学及染色体生物学研究。使用时应特别注意大分子量蛋白的WB优化条件（专用凝胶、延长转膜、蛋白酶抑制），并设置适当的阳性/阴性对照以验证特异性。严格遵循2-8°C保存条件，可获得稳定可靠的实验结果。