兔抗Rad18抗体亲和纯化，跨损伤合成通路研究利器

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的Rad18抗体（货号A301-340A）是一种兔源多克隆抗体，特异性靶向人源E3泛素蛋白连接酶Rad18。该抗体以全IgG形式提供，浓度为200 ?g/ml，经抗原亲和纯化，未偶联标记物，适用于免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）检测。

免疫原与特异性

本抗体的免疫原对应人源Rad18蛋白第445至495位氨基酸残基之间的区域，参考序列号为NP_064550.2（GeneID 56852）。通过表位特异性亲和纯化工艺，将针对Rad18固定化表位的抗体从抗血清中分离纯化，确保高特异性识别目标抗原。

技术参数

参数 | 详细信息

靶标 | Rad18 (RAD18, E3 ubiquitin protein ligase)

反应性 | 人

应用 | 免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 第445位–C末端之间（具体为445-495位）

同型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 200 ?g/ml

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

浓度测定方法

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波长下的吸光度（A280）为1.4。

Western Blot实验方案

推荐稀释度

1:2,000 – 1:10,000

实验条件

封闭及稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜孵育

二抗（细胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020），以避免重链交叉干扰。

免疫沉淀实验方案

推荐用量：6 ?g抗体/mg细胞裂解物

靶点背景信息

蛋白功能

Rad18是一种E3泛素蛋白连接酶，其关键功能是与E2泛素结合酶UBE2B（也称为Rad6b）结合。在DNA复制叉停滞时，Rad18介导PCNA的单泛素化修饰。这一修饰事件能够招募DNA修复聚合酶（例如DNA聚合酶η，Polη），启动跨损伤合成（translesion synthesis, TLS），从而使细胞能够绕过DNA损伤位点继续进行复制，防止复制叉崩溃和基因组不稳定。

别称

E3 ubiquitin-protein ligase RAD18、hHR18、hRAD18、postreplication repair protein hRAD18p、postreplication repair protein RAD18、RAD18 homolog、RAD18, S. cerevisiae, homolog、RING finger protein 73 (RNF73)、RING-type E3 ubiquitin transferase RAD18

产品优势与功能特点

1. 双重应用验证：同时适用于免疫沉淀和Western Blot，且WB稀释范围宽广（1:2,000–1:10,000），IP推荐用量明确（6 ?g/mg裂解物），便于实验设计与优化。

2. 高特异性亲和纯化：采用针对Rad18第445-495位表位的固相亲和纯化，去除非特异性血清成分，显著降低背景信号，提高检测信噪比。

3. 稳定储存配方：缓冲液含0.1% BSA作为稳定蛋白，0.09%叠氮化钠作为防腐剂，Tris缓冲盐水维持离子环境，2–8°C下可稳定保存1年，避免反复冻融导致的活性下降。

4. 精准定量：基于比尔定律（A280=1.4对应1 mg/ml IgG）进行浓度检测，确保批次间一致性和实验可重复性。

5. 适配IP-WB联用：提供针对免疫沉淀后Western Blot的二抗选择建议（抗兔IgG轻链HRP抗体+正常猪血清），有效避免膜上重链的干扰信号。

使用注意事项

本产品仅限研究用途，不可用于临床诊断。

缓冲液中含有叠氮化钠，操作时请佩戴适当防护装备。

IP实验中，6 ?g/mg裂解物为起始推荐量，可根据目标蛋白丰度和抗体批次进行微调。

WB实验中，建议从1:5,000稀释度开始优化，根据信号强度和背景调整稀释倍数。

收货后请立即储存于2–8°C，切勿冷冻。分装可减少污染风险，但需注意分装后仍应保持2–8°C（不可冷冻）。

过期产品不建议使用，请按照机构规定处理含叠氮化钠的废弃物。