兔抗CDC20抗体亲和纯化，覆盖APC/C活性，纺锤体检查点及肿瘤组织CDC20表达谱分析

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的CDC20抗体（货号A301-180A）是一款针对人源细胞分裂周期蛋白20（CDC20）的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，以未偶联完整IgG形式提供。该抗体可识别小鼠及人类样本中的CDC20蛋白，适用于免疫印迹、免疫沉淀及免疫组织化学检测，为细胞周期调控及纺锤体组装检查点研究提供高灵敏度的检测工具。

核心规格参数

参数 详细信息

靶标 CDC20（细胞分裂周期蛋白20）

反应性 小鼠、人类

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第449位氨基酸至C端区域

抗体形式 完整IgG

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人类

浓度 1000 ?g/ml（1 mg/ml）

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8 °C

保质期 到货后1年

突出优势：该抗体浓度为1000 ?g/ml，显著高于常规抗体（通常200 ?g/ml），意味着每微升可提供更多活性抗体，适合大规模或高灵敏度实验。

免疫原与特异性验证

A301-180A抗体采用固相载体上固定的CDC20特异性表位进行亲和纯化。该抗体识别的表位位于人CDC20蛋白的第449至499位氨基酸之间（参考编号NP_001246.2，GeneID 991）。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/mL IgG在A280波长处的吸光度为1.4。

特异性验证要点：

免疫原区域位于蛋白C端（449–499 aa），该区域在CDC20同源物中保守性较高，支持小鼠与人样本的交叉检测

经抗原亲和纯化，显著降低非特异性交叉反应

建议使用CDC20敲低或过表达裂解物作为WB阳性/阴性对照

应用方法与推荐工作浓度

免疫印迹（WB）

推荐稀释范围：1:2,000 – 1:10,000

实验方案要点：

封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST

一抗孵育条件：4°C孵育过夜（推荐）

细胞裂解液检测：使用山羊抗兔IgG重链+轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗

免疫沉淀物检测：使用兔IgG轻链特异性HRP二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景

> 功能性提示：由于抗体浓度高达1000 ?g/ml，即使稀释到1:10,000仍可获得足够的工作浓度（0.1 ?g/ml）。对于高表达样本（如增殖活跃的细胞系），可尝试更高稀释倍数以节省抗体。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物

操作注意事项：

裂解缓冲液中建议添加蛋白酶抑制剂（如PMSF、蛋白酶抑制剂混合物）

抗体与裂解物共孵育：4°C旋转孵育2小时至过夜

使用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物

洗脱后建议使用轻链特异性二抗进行WB检测，避免重链信号（约55 kDa）干扰CDC20目标条带（预期分子量约55–60 kDa，与重链位置相近）

> 关键提示：CDC20的分子量约为55–60 kDa，与IgG重链（约55 kDa）几乎完全重叠。因此，在IP-WB实验中必须使用抗兔IgG轻链特异性二抗（如货号S100-020配套的二抗），否则重链信号会严重掩盖CDC20条带。

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释范围：1:500 – 1:2,000

抗原修复条件：

对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复

可尝试EDTA缓冲液（pH 8.0–9.0），但根据产品信息，pH 6.0柠檬酸盐为推荐方案

染色步骤建议：

1. 脱蜡、水合后，用3% H?O?封闭内源过氧化物酶

2. 微波或高压锅加热至沸腾，维持10–20分钟进行抗原修复

3. 室温冷却20–30分钟，正常血清封闭30分钟

4. 一抗4°C孵育过夜或室温2小时

5. HRP标记二抗及DAB显色，苏木精复染

组织类型参考：CDC20在增殖活跃的组织（如睾丸、骨髓、肿瘤组织）中表达较高，在静止期组织中表达较低。

储存与稳定性指南

储存温度：2–8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致蛋白聚集及活性下降。

防腐剂：0.09%叠氮化钠，可抑制微生物生长。若用于活细胞实验，需透析去除。

缓冲体系：Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，提供稳定的pH环境。

有效期：自到货之日起1年。建议在瓶身标注收到日期，避免超期使用。

应用场景推荐

1. 细胞周期同步化实验：通过WB检测CDC20在细胞周期不同时相的表达变化，验证药物或基因干预的效果。

2. APC/C活性调控机制：使用免疫沉淀结合体外泛素化实验，研究CDC20突变体对APC/C活性的影响。

3. 肿瘤标志物检测：利用IHC或WB检测临床样本中CDC20的表达水平，评估其与肿瘤恶性程度及预后的相关性。

4. 纺锤体组装检查点功能解析：通过IP检测CDC20与Mad2、BubR1等SAC蛋白的相互作用，阐明检查点信号传导机制。

质量控制与批次一致性

每批次A301-180A抗体均经过以下质控检测：

WB验证：检测HeLa细胞裂解液，确认在55–60 kDa处出现特异性条带

IP验证：从HeLa裂解物中免疫沉淀CDC20，并通过WB确认捕获效率

浓度测定：A280吸光度精确定量，确保批间浓度为1000 ?g/ml ± 10%

无菌及内毒素检测：根据客户要求可提供数据报告