兔抗XRN2抗体亲和纯化，消除免疫沉淀后WB中的重链干扰信号

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的XRN2抗体（货号A301-103A）是一款针对人源5′→3′核酸外切酶2（XRN2）的兔多克隆抗体，经抗原亲和纯化，以未偶联完整IgG形式提供。该抗体可识别小鼠及人类样本中的XRN2蛋白，适用于免疫印迹、免疫沉淀及免疫组织化学检测，为RNA代谢及转录终止调控研究提供可靠工具。

核心规格参数

参数 详细信息

靶标 XRN2（5′-3′ exoribonuclease 2）

反应性 小鼠、人类

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第900位氨基酸至C端区域

抗体形式 完整IgG

同型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人类

浓度 200 ?g/ml

缓冲液 Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠

储存条件 2–8 °C

保质期 到货后1年

免疫原与特异性验证

A301-103A抗体采用固相载体上固定的XRN2特异性表位进行亲和纯化。该抗体识别的表位位于人XRN2蛋白的第900至950位氨基酸之间（参考编号NP_036387.2，GeneID 22803）。免疫球蛋白浓度依据比尔定律测定：1 mg/mL IgG在A280波长处的吸光度为1.4。

特异性验证要点：

经抗原亲和纯化，显著降低非特异性交叉反应

免疫原区域位于蛋白C端（900–950 aa），该区域在不同物种间保守性较高，支持小鼠与人样本的交叉检测

建议通过预吸附实验或使用敲除裂解物作为阴性对照，进一步验证特异性

应用方法与推荐工作浓度

免疫印迹（WB）

推荐稀释范围：1:5,000 – 1:25,000

实验方案要点：

封闭液及抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST

一抗孵育条件：4°C孵育过夜（建议）

细胞裂解液检测：使用山羊抗兔IgG重链+轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗

免疫沉淀物检测：使用兔IgG轻链特异性HRP二抗，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低背景

> 功能性提示：宽稀释范围（1:5000–1:25000）允许用户根据目标蛋白丰度灵活优化信噪比。对于高表达样本，可使用1:25000稀释以节省抗体；对于低表达或免疫沉淀后的检测，建议从1:5000开始梯度测试。

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解物

操作注意事项：

裂解缓冲液中建议添加蛋白酶抑制剂，防止XRN2降解

抗体与裂解物共孵育时间：4°C旋转孵育2小时至过夜

使用Protein A/G磁珠或琼脂糖珠捕获免疫复合物

洗脱后建议用轻链特异性二抗进行WB检测，避免重链信号（约55 kDa）干扰XRN2目标条带（预期分子量约120 kDa）

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释范围：1:500 – 1:2000

抗原修复条件：

对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行热诱导抗原修复

可对比尝试pH 9.0 Tris-EDTA缓冲液，但根据产品信息，pH 6.0为更优选择

靶点生物学背景：XRN2

XRN2（5′-3′ exoribonuclease 2）是一种进化保守的5′→3′方向核酸外切酶，在RNA代谢中发挥关键作用。

核心功能：

转录终止：XRN2参与RNA聚合酶II介导的转录终止过程。当poly(A)信号被识别并完成3′端切割后，XRN2降解下游切割产生的RNA片段，触发转录终止。

mRNA 3′端加工：负责降解3′端切割后下游的RNA产物，确保成熟的mRNA 3′端形成。

质量控制：参与异常RNA的降解清除。

储存与稳定性指南

储存温度：2–8°C，请勿冷冻。反复冻融会导致抗体聚集或活性下降。

防腐剂：0.09%叠氮化钠，可抑制微生物生长。注意叠氮化钠对某些细胞实验可能有毒性，如需去除，可通过透析或脱盐柱处理。

稳定剂：0.1% BSA，降低非特异性吸附及管壁损耗。

有效期：自到货之日起1年。建议分装成单次使用量储存于2–8°C，避免反复开管。

应用场景推荐

1. 转录终止机制研究：结合RNA聚合酶II ChIP或run-on实验，利用XRN2抗体检测其在基因3′端的富集变化。

2. RNA加工复合物互作分析：通过免疫沉淀结合质谱鉴定XRN2的相互作用蛋白（如p54nrb/PSF）。

3. 组织表达谱定位：利用IHC检测XRN2在正常组织与病理组织（如肿瘤）中的定位及表达差异。

4. 基因敲低表型验证：以WB方式验证siRNA或CRISPR介导的XRN2沉默效率。

总结：A301-103A抗体是一款经过亲和纯化、验证了多种应用的多克隆抗体，覆盖小鼠及人源XRN2检测。其宽稀释范围（WB 1:5000–1:25000）、明确免疫原定位（900–950 aa）及优化的IHC修复条件（pH 6.0柠檬酸盐），为RNA代谢研究提供了高性价比的免疫检测工具。遵循上述实验参数及问题排查建议，可有效提高实验成功率和数据可重复性。