兔抗BubR1抗体亲和纯化，轻链特异性消除重链背景，精准检测120kda检查点激酶

产品核心规格

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗BubR1抗体（货号A300-995A）是一款靶向纺锤体检查点激酶BubR1（又称BUB1B）的兔多克隆抗体。该抗体经抗原亲和纯化，以Whole IgG形式提供，未偶联标记，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印迹（WB）检测人源样本。关键参数汇总如下：

参数 详细信息

靶点 BubR1 / BUB1B（纺锤体检查点丝氨酸/苏氨酸激酶B）

反应性 人

应用 IHC、IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

浓度 200 ?g/ml

纯化方式 抗原亲和纯化

同种型 IgG

偶联物 未偶联

免疫原与表位特异性

该抗体通过针对人BubR1蛋白N末端区域的特异性表位进行亲和纯化获得。具体而言，识别表位位于第1位至第50位残基之间，参考序列编号基于NP_001202.3（GeneID 701）。免疫原为人BubR1蛋白的该区域。

技术要点：BubR1的N末端区域（1-50位）高度保守，包含参与蛋白-蛋白相互作用的关键基序。靶向该区域的抗体可特异性识别全长BubR1，且因该区域在Bub1同源蛋白中差异较大，交叉反应风险较低。生产中采用固相固定化表位亲和纯化，确保高特异性和低背景。抗体浓度通过比尔定律测定，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4为标准。

储存与稳定性

储存条件：2 - 8°C

有效期：自收货之日起1年

缓冲液组成：Tris缓冲盐水，含0.1% BSA及0.09%叠氮化钠（防腐剂）

应用与实验方案

通用方法

所有免疫印迹实验均使用5% Milk-TBST作为封闭液和抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜（推荐4°C摇动孵育）。

检测体系

实验类型 推荐检测抗体

细胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重链和轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）

推荐工作浓度

应用 推荐稀释度/用量

免疫组化（IHC） 1:100 - 1:500

免疫沉淀（IP） 6 ?g/mg裂解物

免疫印迹（WB） 1:2000 - 1:10000

详细实验提示：

免疫组化（IHC）：推荐使用Tris-EDTA缓冲液（pH 9.0）进行热诱导抗原修复（适用于福尔马林固定石蜡包埋组织切片）。具体步骤：切片脱蜡水化后，将切片置于Tris-EDTA修复液（例如10 mM Tris Base, 1 mM EDTA, 0.05% Tween-20, pH 9.0）中，高压或微波加热至沸腾并维持10-15分钟，自然冷却后封闭。一抗推荐稀释比1:100-1:500，4°C孵育过夜。建议设置阳性对照（如HeLa细胞或扁桃体组织）和阴性对照（兔IgG或省略一抗）。

免疫沉淀（IP）：按照6 ?g抗体/mg总蛋白裂解物的比例加入抗体。推荐使用非变性裂解液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4及蛋白酶抑制剂）制备裂解物。将抗体与裂解物在4°C旋转孵育2-4小时或过夜，然后加入Protein A/G磁珠或琼脂糖珠，继续孵育1-2小时。洗涤后，用SDS上样缓冲液洗脱免疫复合物用于WB分析。

免疫印迹（WB）：推荐起始稀释比为1:2000。若信号过强可提高至1:5000-1:10000；若信号弱可降至1:1000。BubR1分子量约为120 kDa，在不同细胞系中可能出现多条带（可能由于磷酸化修饰或剪切变异），建议使用HeLa或HEK293T细胞裂解物作为阳性对照。转膜后使用5% Milk-TBST封闭1小时，一抗4°C孵育过夜，二抗室温孵育1小时，最后用ECL化学发光检测。

IP后WB检测：建议使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体（配合5%正常猪血清封闭）进行检测。BubR1分子量~120 kDa，与兔IgG重链（~55 kDa）无重叠，但轻链特异性HRP可排除可能的重链降解产物干扰，同时降低背景信号。

靶点背景：BubR1 / BUB1B

分子功能

BubR1（亦称BUB1B、hBUBR1、MAD3L）是细胞周期检查点激酶，属于纺锤体检查点（也称有丝分裂检查点）核心组件。纺锤体检查点的功能是确保所有复制后的染色单体与功能性的双极纺锤体正确连接之前，细胞不进入后期（anaphase），从而防止染色体错误分离和非整倍体形成。

有丝分裂检查点复合物

BubR1与其他检查点蛋白共同组成有丝分裂检查点复合物（MCC），该复合物包含Bub3、Mad2和Cdc20。BubR1在该复合物中的作用是抑制后期促进复合物/环体（APC/C）的活性。APC/C是泛素连接酶，负责标记细胞周期蛋白（Cyclin B）和securin等蛋白以促进降解，从而启动染色体分离。当APC/C被BubR1抑制时，细胞周期停留在有丝分裂中期，直至所有染色体完成正确排列。

同源关系

BubR1被认为是Bub1的旁系同源物（paralog）。两者均含有保守的激酶结构域，但在底物特异性和调控机制上有所区别。BubR1缺乏部分N末端区域，但仍具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性，在检查点信号放大中发挥关键作用。

别名

Bub1A、BUB1B（mitotic checkpoint serine/threonine kinase）、BUB1beta、BUBR1、budding uninhibited by benzimidazoles 1 homolog beta、hBUBR1、MAD3/BUB1-related protein kinase、MAD3L、mitotic checkpoint kinase MAD3L、MVA1、Protein SSK1、SSK1