兔抗XLF抗体亲和纯化，三重验证，一站式DNA修复研究工具

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对XLF（XRCC4样因子，又称NHEJ1或Cernunnos）的兔多克隆抗体，货号A300-730A。该抗体特异性识别人源XLF蛋白，适用于免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白质印迹（WB）检测。抗体经抗原亲和纯化，浓度为200 ?g/ml，为DNA双链断裂修复及V(D)J重组研究提供了高特异性的检测工具。

核心规格参数

项目 | 详细信息

靶点 | XLF (XRCC4-like factor / NHEJ1)

反应性 | 人

应用 | IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第249位至C末端（第299位）区域

亚型 | IgG

偶联物 | 非偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原物种 | 人

浓度 | 200 ?g/ml

保存条件 | 2 - 8 °C

有效期 | 收货之日起1年

缓冲液 | Tris缓冲盐溶液，含0.1% BSA和0.09%叠氮化钠

应用方法与推荐稀释度

蛋白质印迹（WB）

所有WB实验使用含5%脱脂牛奶的TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育条件为过夜孵育。

细胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）作为二抗。

免疫沉淀产物WB：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，封闭液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低轻链非特异性信号。

推荐稀释度：1:2000 - 1:10,000

免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 细胞裂解液

操作要点：

1. 将6 ?g抗体与含1 mg蛋白的细胞裂解液混合

2. 4°C孵育1-2小时或过夜

3. 加入蛋白A/G琼脂糖珠，继续孵育1-2小时

4. 充分洗涤沉淀复合物（建议4-5次）

5. 使用SDS上样缓冲液洗脱，煮沸变性后进行WB检测

免疫组织化学（IHC）

推荐稀释度：1:100 - 1:500

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。该步骤对于暴露XLF的表位、获得清晰染色信号至关重要。

染色建议：

脱蜡、水化后，在柠檬酸缓冲液中微波或高压加热修复

冷却后按常规IHC流程操作

建议同时设置阴性对照（兔IgG或未免疫血清）

研究价值

高特异性的XLF抗体对于以下研究至关重要：

DNA损伤修复通路中XLF与其他NHEJ因子（如XRCC4、Ligase IV）的相互作用

免疫系统发育中V(D)J重组的机制解析

放射治疗或化疗药物敏感性相关标志物检测

小头畸形及免疫缺陷疾病中XLF突变的功能验证

别名列表

non-homologous end-joining factor 1

nonhomologous end-joining factor 1

protein cernunnos

XLF

XRCC4-like factor

储存与稳定性注意事项

1.保存温度：2-8°C，请勿冷冻。缓冲液中含有BSA作为稳定蛋白，可有效防止低浓度抗体（200 ?g/ml）在储存过程中的吸附损失。

2.有效期：收货之日起1年内稳定。

3.防腐剂：缓冲液中含有0.09%叠氮化钠，使用时应遵守实验室安全规范。

4.分装建议：如需长期使用，可小量分装（例如20-50 ?l/管），保存于2-8°C，避免冷冻及反复取用导致的污染风险。

功能性优势总结

1.C末端靶向表位（250-299）：该区域为XLF特有的C端结构域，与XRCC4结合及复合物稳定相关，抗体特异性识别该区域可减少与其他NHEJ因子的交叉反应。

2.三重应用验证：IHC（带抗原修复推荐）、IP（6 ?g/mg裂解液）、WB（1:2000-1:10000）提供完整实验体系，尤其适用于NHEJ通路中蛋白定位、互作及表达水平的多维度分析。

3.IHC优化条件明确：推荐使用柠檬酸缓冲液pH 6.0进行抗原修复，免去用户自行摸索修复条件的耗时，确保FFPE组织染色成功率。

4.亲和纯化+BSA稳定配方：既保证了高特异性，又防止低浓度抗体在操作过程中的非特异性吸附，提高实验可重复性。

5.IP-WB一体化方案：配套抗轻链HRP二抗及猪血清封闭，有效消除沉淀中重链干扰，便于检测XLF与XRCC4或连接酶IV的共沉淀。