兔抗RNA聚合酶II抗体亲和纯化，跨物种转录研究核心工具

一、产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗RNA聚合酶II抗体亲和纯化抗体（货号：A300-653A）是一款以兔为宿主来源、针对人RNA聚合酶II的多克隆抗体。该抗体采用抗原亲和纯化工艺制备，以完整IgG形式提供，浓度为200 ?g/ml，未偶联任何标记物，适用于免疫沉淀及免疫印迹实验。抗体同时识别小鼠和人类来源的RNA聚合酶II，具有跨物种反应性。

二、靶点信息：RNA聚合酶II（RPB1）

RNA聚合酶II是一种依赖DNA的RNA聚合酶，以四种核糖核苷三磷酸为底物，催化DNA转录为RNA。其中，RPB1（RNA polymerase II subunit B1）是该酶的最大亚基，也是催化活性中心的核心组分，与第二大亚基共同形成聚合酶活性中心。RPB1负责合成mRNA前体及多种功能性非编码RNA，是真核生物基因转录调控的关键分子。

别称：DNA-directed RNA polymerase II largest subunit、RPB1、RPBh1、RpIILS、RPO2、RPOL2、hRPB220、hsRPB1、POLR2、POLRA等

三、免疫原与特异性

本抗体识别的表位位于人RNA聚合酶II的C末端重复区（C-terminal repeat）。具体免疫原设计针对第1600至1650位氨基酸之间的区域，该区域对应RPB1亚基的特征性C末端结构域（CTD）。CTD由多个保守的七肽重复序列（YSPTSPS）组成，在转录调控中发挥关键作用，其磷酸化状态是RNA聚合酶II活性的重要标志。

抗体采用固相载体上固定的表位特异性肽段进行亲和纯化，确保对RNA聚合酶II的高特异性识别，避免与非相关核蛋白的交叉反应。

四、产品规格与储存

参数 | 详情

靶点 | RNA聚合酶II（RPB1）

反应性 | 小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形态 | 全IgG

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 200 ?g/ml

缓冲液 | 含0.1% BSA及0.09%叠氮钠的Tris缓冲盐水

储存条件 | 2–8°C

有效期 | 自收货起1年

浓度测定：采用比尔定律测定免疫球蛋白浓度，其中1 mg/ml IgG在280 nm波长的吸光度为1.4。

五、应用与推荐稀释度

应用 | 推荐用量/稀释度 | 备注

免疫沉淀 | 6 ?g/mg 裂解物 | 每毫克总蛋白使用6 ?g抗体

免疫印迹 | 1:2000 – 1:10,000 | 推荐使用3-8% Tris-醋酸凝胶

六、免疫印迹操作要点

通用条件：

封闭液及抗体稀释液：5% Milk-TBST

一抗孵育：过夜（overnight）

细胞裂解液WB检测：

二抗推荐：山羊抗兔IgG重轻链抗体（A120-101P）

免疫沉淀产物WB检测：

二抗推荐：抗兔IgG轻链HRP偶联抗体

封闭液添加：5%正常猪血清（货号S100-020）

凝胶选择：RPB1分子量约为220 kDa，建议使用3-8% Tris-醋酸凝胶以获得最佳分离效果和转移效率。

七、总结

A300-653A是一款针对RNA聚合酶II最大亚基RPB1 C末端重复区的亲和纯化兔多克隆抗体，浓度为200 ?g/ml，适用于IP和WB检测。其对人及小鼠的跨物种反应性、明确的IP用量（6 ?g/mg裂解物）及宽范围WB稀释度（1:2000–1:10,000）使其成为转录调控、RNA聚合酶功能分析及蛋白互作研究的可靠工具。使用3-8% Tris-醋酸凝胶进行WB可获得最佳检测效果。在需要检测总RNA聚合酶II表达水平或进行免疫沉淀富集的实验体系中，该抗体提供了高特异性和高灵敏度的解决方案。