兔抗EDD1抗体亲和纯化，满足低丰度蛋白富集需求

一、产品概述

本产品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款针对人 EDD1（又称 UBR5）蛋白的高亲和力兔多克隆抗体（货号：A300-573A），经抗原亲和纯化制备。该抗体适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）及蛋白质印迹（WB）等多种应用场景，仅供研究使用。

EDD1（E3 identified by differential display 1）是一种孕激素诱导蛋白，属于 HECT 家族 E3 泛素蛋白连接酶。该家族成员通过泛素-蛋白酶体途径特异性识别并降解靶蛋白，在细胞周期调控、DNA 损伤应答及转录调节中发挥关键作用。EDD1 的别名包括 UBR5、DD5、hHYD、HYD 及 progestin-induced protein。

二、产品规格

参数 详细信息

靶标 EDD1 / UBR5

反应种属 人

应用 IHC， IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整 IgG

免疫原 位于第 625–675 氨基酸残基之间（具体表位见下文）

同种型 IgG

偶联物 未偶联

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 1000 ?g/mL（1 mg/mL）

缓冲液 Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7–8，含 0.09% 叠氮化钠

储存条件 2–8°C

有效期 自收货之日起 1 年

三、靶标详细信息

3.1 基因与蛋白信息

Gene ID：51366

Gene Symbol：UBR5

Gene Name：ubiquitin protein ligase E3 component n-recognin 5

UniProt ID：O95071

Protein Name：E3 ubiquitin-protein ligase UBR5

3.2 功能背景

UBR5 编码的蛋白属于 HECT 结构域家族 E3 泛素连接酶。与大多数 HECT 家族成员不同，UBR5 不含有典型的 HECT 结构域，而是具有一个 HECT 样结构域，但仍具有 E3 连接酶活性。该蛋白参与调控多种底物的泛素化修饰，包括 DNA 聚合酶 β、细胞周期蛋白 E、肿瘤抑制因子 p53 等。EDD1 在多种肿瘤中表达异常，与乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌等的发生发展及耐药性密切相关，因此成为癌症研究领域关注的热点分子。

四、抗体制备与纯化

4.1 免疫原及表位定位

本抗体采用的免疫原对应人 EDD1 蛋白序列中第 625–675 氨基酸残基之间的区域。经精确定位，A300-573A 所识别的表位位于第 600–650 氨基酸区间（参考序列 NP_056986.2）。该区域处于 EDD1 蛋白的功能结构域之外，具有较高的抗原特异性，避免了与其它 HECT 家族成员的交叉反应。

4.2 纯化方法

抗体通过抗原亲和层析纯化。将针对 EDD1 表位（第 600–650 位）的特异性多肽固定于固相载体，使抗血清中的特异性 IgG 结合于该表位，再经洗脱获得高纯度抗体。此法确保最终产品中只保留识别目标表位的抗体分子，显著降低非特异性背景。

4.3 浓度测定

免疫球蛋白浓度采用比尔定律（Beer’s Law）测定，以 1 mg/mL IgG 在 280 nm 波长下的吸光度（A280）为 1.4 作为标准。实测浓度为 1000 ?g/mL，该批次抗体可直接用于后续稀释，无需额外浓缩。

4.4 缓冲液与防腐剂

抗体储存于 Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液（pH 7–8），其中含 0.09% 叠氮化钠作为防腐剂。注意：叠氮化钠有毒，操作时请佩戴防护手套，避免接触皮肤或吸入气溶胶。若用于动物实验或需要叠氮化物敏感的细胞体系，建议使用前通过透析或超滤去除叠氮化钠。

五、储存与稳定性

收到产品后，请将抗体置于 2–8°C 条件下储存。切勿冷冻，反复冻融会导致抗体变性聚集、效价下降。在推荐的储存条件下，自收货之日起 1 年内可保持稳定。若需长期保存，可分装后冻存于 -20°C 或 -80°C，但分装时应避免稀释（高浓度抗体抗冻能力较强），且每份建议一次用完，避免反复冻融。

六、应用指南

以下推荐条件均经过实验验证，用户可根据具体实验体系进行优化。

6.1 蛋白质印迹（Western Blot， WB）

推荐稀释比：1:2000 – 1:10000

凝胶系统：建议使用 3–8% Tris-醋酸凝胶，以有效分离 EDD1 大分子量蛋白（EDD1 分子量约 309 kDa）。常规 Tris-甘氨酸凝胶对高分子量蛋白分辨率不足。

封闭液与抗体稀释液：5% 脱脂奶粉 - TBST（Tris 缓冲盐溶液 + 0.1% Tween-20）

孵育条件：一抗 4°C 孵育过夜（推荐），以保证低丰度蛋白的有效检测。

二抗选择：

细胞裂解液 WB：使用山羊抗兔 IgG（重链 + 轻链）HRP 标记二抗（如 A120-101P）。

免疫沉淀后 WB：建议使用抗兔 IgG 轻链 HRP 标记二抗，并在封闭缓冲液中加入 5% 正常猪血清（货号 S100-020）。这一策略可避免检测到 IP 时抗体变性产生的重链（55 kDa）和轻链（25 kDa）信号，从而消除对目标蛋白（约 309 kDa）附近条带的干扰。

阳性对照：建议使用人 HeLa、293T 或 MCF-7 细胞裂解液，这些细胞系中 EDD1 表达水平较高。

6.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation， IP）

推荐用量：每毫克细胞裂解液总蛋白使用 6 ?g 抗体。

例如：若裂解液蛋白浓度为 2 mg/mL，取 1 mg 总蛋白进行 IP，则加入 6 ?g 抗体。

操作建议：

1. 裂解液建议使用非变性裂解缓冲液（如含 0.5% NP-40 或 Triton X-100 的 Tris 缓冲液），以保护蛋白天然构象。

2. 抗体与裂解液 4°C 旋转孵育 2–4 小时或过夜。

3. 加入蛋白 A/G 琼脂糖珠或磁珠，继续孵育 1–2 小时。

4. 洗涤沉淀 3–5 次后，煮沸洗脱，进行 SDS-PAGE 及 WB 检测。

注意事项：由于 EDD1 分子量大且表达丰度相对较低，建议增加起始裂解液量（≥1 mg 总蛋白），并使用高灵敏度化学发光底物进行检测。

6.3 免疫组化（Immunohistochemistry， IHC）

推荐稀释比：1:500 – 1:2000

样本类型：福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片

抗原修复：推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0），高温高压或微波加热进行抗原修复。EDD1 在 FFPE 样本中的表位易被交联遮蔽，若不修复或使用不合适的修复液（如 EDTA pH 9.0），可能导致信号减弱或假阴性。

封闭：建议使用与二抗宿主相同的正常血清（如正常山羊血清）或 3% BSA 室温封闭 30 分钟。

显色系统：推荐使用 HRP/聚合物系统配合 DAB 底物，可获较强信号且背景干净。

对照设置：使用免疫前兔血清或仅加二抗的阴性对照，以及已知阳性表达的组织（如结直肠癌组织切片）作为阳性对照。

本产品仅限研究使用，不得用于诊断或治疗。用户应自行验证抗体在其特定实验体系中的适用性。