兔抗细胞骨架肌动蛋白抗体亲和纯化，加载对照与细胞定位双功能

产品概述

细胞骨架肌动蛋白（Cytoskeletal Actin）是真核细胞中含量最丰富、进化上高度保守的蛋白家族成员，在维持细胞形态、参与细胞运动和胞质分裂等过程中发挥核心作用。本文介绍的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗细胞骨架肌动蛋白抗体亲和纯化（货号：A300-485A）是一款兔源多克隆抗体，特异性识别细胞骨架肌动蛋白的N端区域，适用于免疫印迹（WB）和免疫组织化学（IHC）应用，反应种属包括小鼠和人。该抗体主要针对γ-肌动蛋白（Gamma-actin）设计，同时初步验证表明其也可识别β-肌动蛋白（Beta-actin），因此可作为多种细胞类型的内参检测工具。

基本规格

抗体类型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶联。

免疫原：对应人γ-肌动蛋白（Actin, cytoplasmic 2）N端第1至50位氨基酸残基区间，参考Swiss-Prot条目P63261（GeneID 71）。由于γ-肌动蛋白的N端与β-肌动蛋白高度保守，该抗体也可能识别β-肌动蛋白（GeneID 60）。

纯化方式：抗原亲和纯化——将特异性表位固定于固相载体，富集高特异性抗体。

浓度：1000 ?g/ml（测定方法：比尔定律，1 mg/mL IgG在A280nm处吸光度为1.4）。

缓冲体系：Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮化钠作为防腐剂。

储存与稳定性：2-8°C保存，自收货之日起稳定期1年。

反应种属与特异性

已验证反应种属：小鼠（Mouse）和人（Human）。抗体识别表位位于γ-肌动蛋白的N端区域（第1-50位）。由于β-肌动蛋白与γ-肌动蛋白在N端具有高度同源性，产品说明指出该抗体很可能也识别β-肌动蛋白。用户在使用时应注意，WB检测通常会显示出一条约42 kDa的单一清晰条带，对应两种亚型的总信号。如需区分亚型，建议结合亚型特异性抗体或质谱分析。

推荐应用与实验条件

1. 免疫印迹（Western Blot，WB）

推荐稀释比：1:2,000 至 1:10,000

通用WB操作要点：

封闭液和抗体稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜（O/N）

二抗选择：使用山羊抗兔IgG（重链+轻链）抗体（如A120-101P）

预期条带：约42 kDa。由于肌动蛋白在细胞中表达丰度极高，建议适当控制上样量（5-15 ?g总蛋白/泳道）以避免信号过饱和。

应用场景：

作为Western blot的上样对照（loading control），校正蛋白定量和转膜效率。

检测总细胞骨架肌动蛋白表达水平的变化。

2. 免疫组织化学（IHC）

推荐稀释比：1:2,000 至 1:10,000

抗原修复：

通常可能不需要抗原修复：对于大多数组织切片，可直接进行染色。

增强染色：在某些情况下，使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复可提高染色强度和质量，尤其适用于福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片。

适用样本：小鼠或人源组织冰冻切片或石蜡切片

预期定位：细胞质，特别是细胞皮层和应力纤维。肌动蛋白在细胞中普遍表达，IHC染色应呈现均匀的胞质分布。

细胞骨架肌动蛋白的生物学功能

肌动蛋白是真核细胞骨架的核心组分，由多个高度保守的基因编码。哺乳动物中主要表达六种肌动蛋白亚型，其中细胞质中主要表达β-肌动蛋白和γ-肌动蛋白。

别名：Gamma-actin、DFNA20、DFNA26（耳聋相关）、HEL-176等

主要功能：

维持细胞结构：肌动蛋白聚合形成微丝，构成细胞骨架网络，为细胞提供机械支持和形状。

参与细胞运动：通过动态的聚合和解聚，介导细胞迁移、胞质分裂、吞噬作用和细胞突起形成。

肌肉收缩与非肌肉运动：在非肌肉细胞中，肌动蛋白与肌球蛋白相互作用产生收缩力。

内参应用：由于其在所有真核细胞中稳定高表达，肌动蛋白（特别是β-actin和γ-actin）是Western blot中最常用的上样对照之一。

β-肌动蛋白与γ-肌动蛋白的差异：尽管两者高度同源（氨基酸序列相似性>98%），但它们在细胞内的分布和功能存在细微差异。γ-肌动蛋白在细胞边缘和应力纤维中富集程度更高，而β-肌动蛋白更集中于细胞前缘。本抗体同时识别两种亚型，可提供总细胞骨架肌动蛋白的信号。

技术建议与注意事项

稀释优化

WB推荐的1:2,000-1:10,000稀释范围较宽。由于肌动蛋白丰度极高，建议从1:10,000起始，根据信号强度反向调整。过高的抗体浓度（如1:2,000）可能导致非特异性条带或背景过深。对于IHC，同样建议从1:5,000开始，再根据染色效果优化。

作为上样对照的使用建议

上样量控制：肌动蛋白信号容易饱和，建议对样品进行梯度上样（如5、10、15、20 ?g），使用1:10,000稀释的抗体预实验，确定线性检测范围。

信号强度对比：理想的上样对照应在不同样本间信号强度一致。若发现信号不均，应先确认蛋白定量是否准确，转膜是否均匀。

剥离与重探：如果膜上已用其他抗体检测过高丰度蛋白，剥离后重探肌动蛋白可能信号减弱。建议单独使用一张膜或先检测低丰度靶标，最后再检测肌动蛋白。