兔抗Claspin抗体亲和纯化，赋能复制胁迫通路研究方案

产品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的Claspin抗体（货号A300-266A）是一种兔源多克隆抗体，特异性靶向人源Claspin蛋白。该抗体以全IgG形式提供，浓度为1000 ?g/ml，经抗原亲和纯化，未偶联标记物，适用于免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）和Western Blot（WB）检测。

免疫原与特异性

本抗体的免疫原对应人源Claspin蛋白第725至775位氨基酸残基之间的区域，参考序列号为AAG24515.1（GeneID 63967）。通过表位特异性亲和纯化工艺，将针对Claspin固定化表位的抗体从抗血清中分离纯化，确保高特异性识别目标抗原。

技术参数

参数 | 详细信息

靶标 | Claspin (CLSPN)

反应性 | 人

应用 | 免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）、Western Blot（WB）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

免疫原 | 第725–775位氨基酸区间

同型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

抗原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

储存条件 | 2–8 °C

保质期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

浓度测定方法

免疫球蛋白浓度采用比尔定律测定，其中1 mg/ml IgG在280 nm波长下的吸光度（A280）为1.4。

Western Blot实验方案

推荐稀释度

1:500 – 1:2,500

实验条件

封闭及稀释液：5%脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜孵育（4°C）

二抗（细胞裂解液WB）：山羊抗兔IgG重链和轻链抗体（货号A120-101P）

二抗（免疫沉淀物WB）：使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中加入5%正常猪血清（货号S100-020），以避免免疫沉淀洗脱物中IgG重链的干扰。

样品制备建议

Claspin分子量较大（约150-170 kDa），建议使用含有蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。为检测磷酸化修饰，需同时添加磷酸酶抑制剂（如Na3VO4、β-甘油磷酸钠）。

免疫沉淀实验方案

推荐用量：6 ?g抗体/mg细胞裂解物

裂解液：推荐使用非变性裂解缓冲液（如50 mM Tris-HCl pH 7.5，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脱氧胆酸钠，含蛋白酶和磷酸酶抑制剂），以保留蛋白复合物完整性。

捕获基质：Protein A琼脂糖或磁珠。

免疫组化实验方案

推荐稀释度：1:500 – 1:2,000

抗原修复：对于福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织切片，推荐使用柠檬酸缓冲液（pH 6.0）进行热诱导抗原修复。

封闭：使用5%正常血清（与二抗同源）封闭非特异性结合位点。

检测：可采用生物素化二抗配合DAB显色，或荧光标记二抗进行免疫荧光。

靶点背景信息

蛋白功能

Claspin是一种检查点蛋白，在复制胁迫下与检查点激酶1（Chk1）相互作用并调控其活性。Claspin与Chk1的相互作用是ATR依赖性Chk1激活所必需的。该相互作用涉及Claspin的磷酸化修饰，而Chk1激酶活性可能参与这一磷酸化过程。

Claspin在DNA损伤存在或不存在的情况下均可定位于染色质，并且与增殖细胞核抗原（PCNA）结合，作为DNA复制机器的必需组分。这种与复制机器的关联提示Claspin在连接DNA复制与DNA损伤信号传导及Chk1激活中发挥关键作用。

分子机制

在未受干扰的S期中，Claspin与PCNA结合，定位在复制叉处。当复制叉遭遇阻滞（如核苷酸耗竭、DNA损伤或拓扑异构酶抑制剂）时，ATR被激活并磷酸化Claspin，促进其与Chk1的结合。Claspin作为一种衔接蛋白，将Chk1呈递给ATR进行磷酸化激活。活化的Chk1随后磷酸化CDC25A和WEE1，抑制CDK活性，诱导细胞周期阻滞并稳定复制叉。

Claspin的表达和稳定性受细胞周期调控。其在G1期水平较低，S期和G2期升高，进入有丝分裂时被APC/C复合物降解。