兔抗BARD1亲和纯化抗体：抗原亲和纯化，适用于人源样本IP/WB检测

一、产品概述

本文介绍一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的针对人BARD1（BRCA1相关RING结构域蛋白1）的兔多克隆抗体（货号：A300-263A）。该抗体特异性识别BARD1蛋白的第250–300位氨基酸区域，经抗原亲和纯化后以完整IgG形式提供，未偶联标记物。已验证反应种属为人，可应用于免疫沉淀（IP）及免疫印迹（WB）实验。

BARD1与BRCA1形成异源二聚体，作为E3泛素连接酶参与DNA损伤应答、双链断裂修复及中心体数量调控。可靠的特异性抗体对于研究BARD1在基因组稳定性维持及肿瘤发生中的功能至关重要。

二、详细规格参数

参数 | 信息

靶标 | BARD1（BRCA1 associated RING domain 1）

反应种属 | 人

应用 | IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第250–300位氨基酸之间的区域

亚型 | IgG

偶联物 | 未偶联

纯度 | 抗原亲和纯化

免疫原种属 | 人

浓度 | 1000 ?g/ml

存储条件 | 2–8 °C

有效期 | 收货后1年

缓冲液 | Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7–8，含0.09%叠氮化钠

三、抗原表位与生产信息

该抗体识别人BARD1蛋白第250–300残基之间的表位，参考序列号为NP_000456.1（GeneID 580）。免疫原对应此区间。

纯化工艺采用固相载体固定的表位特异性亲和层析，确保仅富集识别目标表位的IgG分子，显著降低非特异性交叉反应。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定（1 mg/mL IgG在A280处吸光度为1.4）。

四、应用方法与推荐条件

4.1 免疫沉淀（IP）

推荐用量：6 ?g 抗体 / mg 蛋白裂解液

根据抗体浓度1000 ?g/ml换算，6 ?g对应6 ?l抗体。建议在裂解缓冲液中加入适当蛋白酶抑制剂，4°C旋转孵育过夜后使用Protein A/G琼脂糖珠捕获复合物。

4.2 免疫印迹（WB）

推荐稀释比：1:500 至 1:2500

通用条件：  

所有WB实验均采用含5%脱脂牛奶的TBST作为封闭液及抗体稀释液。一抗孵育方式为4°C过夜。

检测体系差异：

样本类型 | 推荐二抗 | 特殊说明

细胞裂解液WB | 山羊抗兔IgG（H+L）二抗（货号A120-101P） | 无需额外阻断

免疫沉淀产物WB | 抗兔IgG轻链HRP偶联抗体 | 封闭缓冲液中需添加5%正常猪血清（货号S100-020）以阻断重链交叉反应

注意事项：  

由于BARD1分子量约为87 kDa（与BRCA1形成复合物后更大），建议使用10–12% SDS-PAGE或梯度凝胶。转膜后可考虑使用PVDF膜以增强大分子量蛋白的吸附。

五、储存与稳定性

未稀释抗体必须储存于2–8°C，严禁冷冻。冷冻会导致IgG聚集和活性丧失。在推荐条件下，自收货之日起可稳定保存1年。缓冲液中的0.09%叠氮化钠可抑制微生物生长，若需用于细胞培养或活体实验，请使用脱盐柱或透析去除。

六、操作建议与常见问题排查

6.1 WB无信号或弱信号

提高一抗浓度：建议从1:500开始试探性稀释。

延长曝光时间：BARD1本底表达水平可能低于管家蛋白，建议ECL曝光5–30分钟。

使用阳性对照：建议使用过表达BARD1的细胞裂解液（如HEK293T转染BARD1-Flag）验证抗体活性。

检查蛋白分子量：确认转印后保留>100 kDa区域，部分低分子量marker不足以指示。

6.2 IP出现非特异性条带

严格执行预清除：裂解液与同型IgG或无关抗体+Protein A/G珠子孵育1小时。

增加洗涤严谨性：使用含0.5% NP-40或0.1% SDS的裂解缓冲液洗涤3–5次。

使用轻链特异性二抗：WB检测IP产物时务必采用抗兔IgG轻链HRP抗体，避免重链（约55 kDa）干扰目标信号。

6.3 保存与运输注意事项

产品在冰袋或冷藏条件下运输。收货后应立即存于2-8°C，不可分装于无蛋白的低吸附管中长期储存，否则抗体浓度会因表面吸附而下降。若需长时间多次取用，可于无菌条件下分装至含载体蛋白（如0.1% BSA）的管中，但分装后仍需冷藏，勿冻存。