山羊抗SA2抗体亲和纯化，覆盖ICC与WB双平台，推荐用量明确

产品概述

本品为艾美捷Bethyl Laboratories推出的山羊源抗SA2（Stromal Antigen 2）多克隆抗体（货号：A300-158A），经表位特异性亲和纯化，以未标记形式提供。SA2是黏连蛋白复合物的核心组分，在姐妹染色单体粘连、染色体正确分离及转录调控中发挥关键作用。本抗体识别人和小鼠SA2蛋白，适用于免疫细胞化学和免疫印迹检测，是细胞分裂、表观遗传调控及癌症相关研究的可靠工具。

基本规格参数

参数 具体信息

靶标 SA2（Stromal Antigen 2）

反应种属 小鼠、人

应用 ICC, WB

宿主 山羊

克隆性 多克隆

形式 全IgG

免疫原 位于第1100-1150氨基酸残基之间的区域

自身抗体亚型 IgG

标记物 未标记

纯度 抗原亲和纯化

抗原种属 人

浓度 1000 ?g/ml （1 mg/ml）

保存温度 2 - 8 °C

有效期 自收货之日起1年

缓冲液 Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮钠

生产与纯化工艺

本抗体的生产采用表位特异性亲和纯化策略：

1. 免疫原设计：针对人SA2蛋白中第1100至1150位氨基酸之间的区域（参考序列NP_006594.3）。该区域位于蛋白质C端附近，特异性较高。

2. 免疫程序：使用上述合成肽段对山羊进行免疫，诱导产生特异性抗血清。

3. 亲和纯化：将SA2特异的表位肽固定于固相支持介质上，通过亲和层析从抗血清中特异性分离目标抗体。该策略确保抗体仅识别目标表位，减少非特异性背景。

4. 浓度测定：依据比尔定律，1 mg/ml IgG在280 nm波长下的吸光度（A280）为1.4。本品最终浓度为1 mg/ml（1000 ?g/ml）。

表位定位：抗体识别的表位位于人SA2蛋白的第1100-1150残基之间（NP_006594.3编号）。该区域在小鼠SA2中高度保守，因此抗体可与小鼠源SA2发生交叉反应。

特异性验证

反应种属：人、小鼠

识别表位：SA2蛋白C端附近区域（1100-1150 aa）

经ELISA和免疫印迹验证的特异性：与人及小鼠SA2特异性结合

潜在交叉反应：由于SA2属于黏连蛋白复合物亚基家族，与SA1（STAG1）具有一定同源性。本抗体是否识别SA1未明确验证，建议在实验中设置SA1已知表达的对照样本进行评估。

生物学背景

SA2（基因符号：STAG2，GeneID: 10735）是黏连蛋白复合物的关键亚基之一。黏连蛋白复合物在细胞分裂过程中发挥以下核心功能：

姐妹染色单体粘连：在有丝分裂和减数分裂过程中将复制后的姐妹染色单体保持在一起。

染色体正确分离：在前期和中期，黏连蛋白必须从姐妹染色单体上解离，使它们能够在后期向细胞两极正常分离。SA2在此过程中参与调控黏连蛋白的解离。

转录调控：有趣的是，SA2还通过与NF-κB相互作用表现出转录调节活性，参与基因表达调控。

临床意义：STAG2基因突变在多种癌症（如胶质母细胞瘤、尤文肉瘤、膀胱癌等）中高频出现，提示SA2作为肿瘤抑制因子的潜在角色。本抗体可用于研究SA2在细胞周期、肿瘤发生及转录调控中的具体机制。

应用与推荐稀释比例

以下推荐稀释比例为起始参考值。需注意，并非所有列出的应用均已在本实验室完成具体验证，建议用户根据样本类型和实验体系进行梯度优化。

应用 推荐稀释比例 备注

免疫细胞化学 1:500 - 1:2,000

免疫印迹 1:2,000 - 1:10,000 详见下方标准操作条件

免疫印迹标准操作条件（经实验室验证）：

封闭液和抗体稀释液：5% 脱脂牛奶-TBST

一抗孵育：过夜（4°C或室温）

二抗推荐：使用驴抗山羊IgG（H+L）抗体（货号A50-101P）

免疫细胞化学（ICC）典型流程：

细胞经固定（如4%多聚甲醛）和透化（如0.1% Triton X-100）后，与一抗（1:500-1:2000）孵育，随后与荧光标记的二抗反应。建议同时进行DAPI核染色以辅助定位。SA2主要定位于细胞核，在有丝分裂期与染色体共定位。

阳性对照建议：

人源细胞系（如HeLa、293T）或小鼠细胞系（如NIH/3T3）的全细胞裂解物

已知SA2高表达的细胞（可通过Western Blot预验证）

阴性对照建议：

使用正常山羊IgG替代一抗

使用SA2敲低或敲除细胞裂解物（如CRISPR/Cas9介导的STAG2敲除细胞）

使用与保存注意事项

保存条件：请于2-8°C条件下保存，切勿冷冻。反复冻融会导致抗体变性失效。在指定条件下，自收货之日起1年内稳定有效。

缓冲液成分：本抗体溶于Tris-柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液（pH 7-8），含0.09%叠氮钠作为防腐剂。如后续实验涉及对叠氮钠敏感的酶学检测或细胞培养，请通过透析或脱盐柱去除。

稀释缓冲液建议：WB使用5%牛奶-TBST；ICC推荐使用含1% BSA和0.1% Triton X-100的PBS，以降低非特异性吸附并促进渗透。

分子量信息：人SA2蛋白的理论分子量约为141 kDa（基于Uniprot Q8N3U4）。在还原性SDS-PAGE中，可观察到约140-150 kDa的条带。若在预测分子量以外位置观察到额外条带，可能为降解产物、翻译后修饰或非特异性条带。

实验优化提示：

若WB信号过强出现非特异性背景，可尝试降低一抗浓度（如1:5000或更高稀释度）或缩短曝光时间。

若信号过弱，可增加上样量（推荐30-50 μg总蛋白/泳道）或延长一抗孵育时间。

ICC实验中，若核信号不明显，可优化固定/透化条件（如使用甲醇固定或降低Triton X-100浓度）。