Epigentek丨艾美捷代理货号：A-1014-010 5-甲基胞嘧啶(5-mC)单克隆抗体[33D3]，DNA甲基化研究的核心工具

在生命科学的深邃图谱中，遗传密码由A、T、C、G四种碱基书写而成，是生命蓝图的基石。然而，超越这经典序列之上，还存在着一个更为精细的调控层——表观遗传学。其中，DNA甲基化作为最重要的表观遗传修饰之一，如同在DNA序列上添加的精密“化学标记”，深刻影响着基因的表达命运，而不改变DNA序列本身。在这一领域中，5-甲基胞嘧啶 (5-mC) 单克隆抗体[33D3]货号：A-1014-010尤其是高特异性的单克隆抗体，成为了科学家们解读表观遗传密码的关键。

Epigentek集团公司是创新技术和表观遗传学相关研究产品的开发商和供应商。公司开发了包括400多个专利产品的全面的产品组合，为表观遗传学方面的研究和新药研发提供全面系统的解决方案。各界备受推崇的学者、制药企业以及先进的生物技术公司都在使用Epigentek产品。相比普通方法的产品而言，这些独特的产品在科研分析过程中更简单、更快捷、更方便、更有效。

第五碱基：5-甲基胞嘧啶与DNA甲基化

DNA甲基化的核心过程，是在DNA甲基转移酶家族的催化下，将一个甲基集团精确地添加到胞嘧啶环的第五位碳原子上，从而将普通的胞嘧啶转化为5-甲基胞嘧啶。这一微小却至关重要的化学修饰，使5-mC赢得了“第五碱基”的美誉。它并非随机分布，在哺乳动物基因组中，5-mC尤为富集于CpG岛——这些是胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸高度集中的区域。

DNA甲基化在哺乳动物的生长发育中扮演着不可或缺的角色。它如同一个基因表达的“开关”：当基因的启动子区域被5-mC标记，通常会招募抑制性蛋白复合物，导致染色质结构变得致密，从而关闭该基因的转录活性。这种机制对于细胞分化、基因组印迹、X染色体失活等关键生物学过程至关重要。然而，这一精密的调控系统一旦失衡，便会引发严重后果。研究表明，DNA甲基化状态具有组织特异性，并且在肿瘤发生过程中，普遍呈现出两种看似矛盾的趋势：在全局基因组范围内出现低甲基化，这可能激活原癌基因并导致基因组不稳定；同时，在特定抑癌基因的启动子区域却发生高甲基化，从而沉默这些基因的功能，为肿瘤细胞的增殖与存活铺平道路。因此，精确绘制5-mC在基因组中的分布图谱，已成为理解发育生物学、肿瘤学及多种疾病机制的核心课题。

合成的含有不同数量5的寡聚物-用抗5-甲基胞嘧啶捕获甲基胞嘧啶来自不同公司的抗体，然后进行比色分析检测以进行比较。结果显示Epigentek的5-mC抗体在捕获方面具有最高的敏感性和特异性甲基化DNA片段。

精准识别的利器：33D3克隆小鼠单克隆抗体

为了在复杂的DNA混合物中特异性地“捕捉”到5-mC这一微小修饰，科研人员开发出了多种工具，其中抗体因其高特异性和兼容多种实验技术平台而备受青睐。本文所介绍的便是一款性能优质的小鼠源性单克隆抗体，它靶向5-甲基胞嘧啶，克隆号为33D3。

1. 抗体特性与质量控制

这是一款经过严格纯化的MeDIP/ChIP级别抗体。其免疫原是通过将5-mC与卵清蛋白偶联而制成，以此成功激发了小鼠的免疫反应，并最终通过杂交瘤技术筛选出能稳定分泌单一特异性抗体的33D3克隆。该抗体属于IgG1亚型，并采用Protein A进行纯化，确保了抗体的高纯度和均一性。最终产品为1 mg/ml浓度的纯化IgG，溶于pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，便于直接用于实验。

2. 优质的特异性与广泛的适用性

此抗体的核心价值在于其优质的特异性。它能够精准识别5-mC这一修饰碱基本身，而几乎不与未修饰的普通胞嘧啶发生交叉反应。这种高度的区分能力，是所有基于该抗体的实验结果可靠性的根本保障。此外，由于其识别的是进化上高度保守的表位，该抗体具有广泛的种属反应性，可应用于来自人类、小鼠、大鼠等多种生物的样本，极大地扩展了其应用范围。

实践指南：应用、储存与操作

1.多元化的应用场景

这款33D3克隆5-mC抗体是一款多功能的科研工具，兼容多种主流的分子生物学和细胞生物学技术：

点杂交/斑点印迹： 用于快速定性检测样本中是否存在甲基化DNA，建议稀释比例为1:1000至1:2000。

免疫组织化学/免疫荧光： 用于在组织切片或细胞中直观地定位和观察DNA甲基化的空间分布，建议稀释比例为1:100至1:500。

酶联免疫吸附试验： 用于对DNA甲基化水平进行相对定量，建议稀释比例为1:1000至1:2000。

甲基化DNA免疫共沉淀： 这是一种强大的技术，能够富集基因组中被甲基化的DNA片段，以便进行后续的PCR、微阵列或高通量测序分析。建议使用量为每反应0.5至1微克。

需要强调的是，上述建议稀释度仅为起始参考，使用者在实际研究中需根据具体实验条件、样本类型和试剂，通过预实验来优化确定最佳工作浓度。

2.规范的储存与操作

为确保抗体活性和实验的重复性，正确的储存和处理至关重要：

储存条件： 抗体在4°C条件下可稳定保存6个月（自发货日起）。为进行长期储存，建议将抗体分装成小份，并保存于-20°C环境中。务必避免反复冻融，因为多次冻融循环会损害抗体的结合能力，导致效价下降。

操作建议： 在首次打开样品管盖之前，建议先进行低速离心，将管壁和管盖内的液体收集至管底，以确保取用剂量的准确并最大程度回收产品。

这款抗体在文献和产品目录中可能以多种名称出现，如5-methylcytidine、anti-5-methylcytosine、anti-5mC、5meC等，研究者在使用数据库检索或比对产品时需留意。

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作为Epigentek 的独家代理，艾美捷科技为中国客户提供包括DNA甲基化研究工具、染色质结构分析、组蛋白甲基化研究、乙酰化与去乙酰化分析、DNA损伤与修补、组蛋白磷酸化、蛋白泛素化等系列研究试剂盒和抗体产品等全系列解决方案。