PARP2化学发光检测试剂盒：信噪比优异，适用于化合物库筛选

在DNA损伤修复领域，PARP家族是一类关键的核酶，通过催化多聚ADP-核糖化（PARylation）参与DNA单链断裂修复、基因组稳定性维持及细胞应激响应。PARP2作为该家族的重要成员，虽然仅贡献约10%的总PARP活性，但在DNA修复、氧化应激应答及线粒体片段化中发挥不可替代的作用。基因敲除研究显示，PARP2还参与脂肪生成、精子发生及胸腺细胞存活，并作为雌激素受体（ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）的共调节因子。值得注意的是，PARP2在前列腺癌中过表达，并通过FOXA1/AR通路促进疾病进展。临床上已获批的PARP抑制剂（如奥拉帕尼、尼拉帕尼等）同时靶向PARP1和PARP2，但其对PARP2选择性抑制的贡献及潜在的治疗优势仍在深入研究中。因此，开发能够精准、高效检测PARP2酶活性的分析工具，对于靶向PARP2的药物发现及机制研究至关重要。

由艾美捷代理的BPS Bioscience推出的PARP2 Chemiluminescent Assay Kit（货号：80552），正是为满足上述需求而设计的一套完整化学发光检测方案。该试剂盒采用基于组蛋白包被板的ELISA原理，通过检测生物素化ADP-核糖掺入底物的量来定量PARP2的酶活性，适用于小分子抑制剂筛选、酶动力学研究及高通量筛选（HTS）。以下从检测原理、试剂盒组分、操作流程、应用场景及性能特点等方面进行详细介绍。

图1. PARP2化学发光检测试剂盒示意图。

组蛋白被涂覆在384孔板上。接下来，在优化的检测缓冲液中，将生物素化的NAD+混合物（称为PARP底物混合物）与PARP2酶和活化的DNA模板一起孵育。然后，用链霉亲和素-HRP处理板，随后加入ELISA ECL底物，产生化学发光，可使用化学发光仪进行测量。化学发光信号与PARP2活性成正比。

一、检测原理：化学发光法定量PARP2的自身PARylation及底物PARylation

本试剂盒采用经典的PARP酶活性ELISA检测模式，核心原理如下：

底物包被：96孔或384孔板预先包被组蛋白或特定核蛋白作为PARP2的底物。组蛋白是PARP家族天然底物，其上的谷氨酸残基可被PARylation修饰。

PARP2反应：加入重组人源PARP2酶（氨基酸2-583，包含催化结构域和DNA结合域）、生物素化NAD?（biotin-NAD?，作为ADP-核糖供体）以及含活化DNA的PARP检测缓冲液。在DNA存在下，PARP2被激活，催化生物素化ADP-核糖单元聚合到组蛋白底物上，同时发生自身PARylation。反应产物为生物素标记的PAR链。

检测：洗涤去除未结合的试剂后，加入链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶（Streptavidin-HRP）。链霉亲和素与生物素化PAR链高效结合。再次洗涤后，加入化学发光HRP底物，HRP催化产生光信号。发光强度与固定化PAR链的量呈正比，即与PARP2酶活性呈正比。

抑制剂效应：若体系中加入PARP2抑制剂，酶活性被阻断，生物素化PAR链合成减少，发光信号降低。通过比较抑制剂组与对照组（DMSO或无抑制剂）的发光值，计算抑制率及IC50。

与荧光偏振法或荧光法相比，化学发光检测具有背景极低、信噪比高、动态范围宽的优势，尤其适合需要高灵敏度的筛选应用。同时，该方法为终点法（非实时），可批次处理大量样品，与自动化工作站兼容良好。

二、试剂盒组分与规格

该试剂盒提供两种规格：96孔板形式（100次反应）和384孔板形式（400次反应），每个试剂盒包含以下核心组分：

重组人PARP2酶（氨基酸2-583）：纯化自昆虫细胞或大肠杆菌表达系统，经活性验证，确保批次间一致性。

生物素化NAD?（biotin-NAD?）：即用型溶液，作为PARylation反应的ADP-核糖来源。

PARP检测缓冲液：含有活化DNA（如剪切的鲑鱼精DNA）及必要的辅因子（Mg??、DTT等），以激活PARP2并维持其催化活性。

链霉亲和素-HRP：浓缩液，使用前需按说明书稀释。

化学发光底物：HRP的发光底物（如鲁米诺/过氧化物溶液）。

10×洗涤缓冲液：需稀释后使用。

封闭缓冲液：用于减少非特异性结合。

详细操作说明书：包含包被步骤、反应条件及数据分析模板。

所有组分在收货后按指示存储（通常为-80°C或-20°C，具体以说明书为准），自收货之日起6个月内保持最佳性能。生物素化NAD?和链霉亲和素-HRP需避免反复冻融。

三、实验流程简要说明

以下为典型96孔板操作流程（试剂盒通常已提供预包被组蛋白的板，或需用户自行包被，以说明书为准）：

1. 试剂准备

从-80°C取出PARP2酶、生物素化NAD?、检测缓冲液等，置于冰上解冻。

准备待测抑制剂：用检测缓冲液或DMSO稀释至所需浓度（建议设置10个浓度梯度，2倍或3倍倍比稀释）。注意最终DMSO浓度不得超过1%（见禁忌说明）。

稀释洗涤缓冲液至1×工作浓度。

2. 反应体系构建

使用提供的预包被组蛋白微孔板（若未预包被，需先用组蛋白包被过夜，然后封闭）。

每孔加入50 uL检测缓冲液（含活化DNA）。

加入10 uL稀释的PARP2酶（推荐起始浓度0.5–5 nM，需预实验优化，使信号处于线性区间）。

加入10 uL待测抑制剂或对照（缓冲液/DMSO/阳性对照如奥拉帕尼、他拉唑帕尼等）。

室温预孵育10分钟。

加入10 uL生物素化NAD?（终浓度通常为0.5–2 uM）。

用封板膜覆盖，室温或30°C孵育30–60分钟（使PARylation反应充分进行）。

3. 检测步骤

弃去反应液，每孔加入200 uL 1×洗涤缓冲液，洗涤3次。

加入100 uL稀释的链霉亲和素-HRP（按说明书比例稀释），室温孵育30分钟。

再次洗涤3次。

加入100 uL化学发光底物，立即使用发光酶标仪读取发光值（RLU），积分时间0.5–1秒。

4. 数据分析

四、应用场景

本试剂盒主要面向以下两大类核心应用：

1. PARP2小分子抑制剂的筛选与IC50测定

2. 酶动力学研究与作用机制解析

五、存储稳定性与运输条件

试剂盒采用-80°C干冰运输。收货后，PARP2酶和生物素化NAD?应立即存放于-80°C；链霉亲和素-HRP和化学发光底物通常存放于-20°C（避光）；检测缓冲液和洗涤缓冲液可于4°C保存。建议将PARP2酶分装为单次使用量（如2 uL/管），避免反复冻融。在正确存储条件下，所有组分自收货之日起6个月内性能稳定。

文献参考：

Gui B., et al., 2019 Proc Natl Acad Sci USA 116 (29): 14573-14582.