重组人OX40L蛋白，用于抗OX40L中和抗体筛选及免疫治疗药物活性比对

1. 产品概述

由艾美捷代理BPS Biosciences推出的重组人OX40L（CD252/TNFSF4）（His标签）（货号：71185），其胞外区片段覆盖氨基酸51–183。构建体N端融合10×His标签，经亲和层析纯化。该产品适用于OX40-OX40L结合研究、免疫共刺激通路调控机制探索及肿瘤免疫/自身免疫病药物开发等场景。

项目 | 规格

构建体 | His-OX40L(51–183)

标签 | N端10×His标签

宿主/表达系统 | HEK293哺乳动物细胞

分子量 | 18 kDa（SDS-PAGE因糖基化显示更高表观分子量）

纯度 | ≥90% |

剂型 | 水相缓冲液 |

保存稳定性 | -80°C下至少6个月

2. 背景与功能

OX40L（又称CD252）是肿瘤坏死因子配体超家族成员，其唯一受体为OX40（CD134），主要表达于活化的T细胞表面。OX40L与OX40结合后，为T细胞提供关键的共刺激信号，驱动T细胞活化、分化、增殖及效应功能发挥。

OX40L的表达谱具有免疫微环境特征：除活化的抗原提呈细胞（树突状细胞、B细胞）外，NK细胞也表达OX40L并参与其活化和细胞毒性调控。在肿瘤微环境中，OX40L-OX40轴的激活可增强肿瘤特异性T细胞的抗肿瘤免疫应答，临床前研究表明OX40激动剂可改善肿瘤无进展生存。相反，在自身免疫性疾病中，该通路的过度激活加剧了致病性T细胞应答，因此OX40拮抗剂在类风湿关节炎、炎症性肠病等适应症中具有治疗潜力。

OX40/OX40L通路已成为肿瘤免疫和自身免疫病药物研发的双向靶点。FDA已授予OX40激动剂BMS-986178等快速通道资格，而OX40L中和抗体（如amlitelimab）也在自身免疫病中推进至临床阶段。

3. 产品设计与质量控制

3.1 构建体设计  

截短策略：仅表达胞外受体结合区（51–183），去除跨膜和胞内结构域，以可溶性形式呈现，便于体外结合实验。  

10×His标签：采用延长型His标签（常规6×His的加长版本），增强与金属螯合树脂的结合亲和力，有利于从表达上清中高效捕获低丰度蛋白，同时便于IMAC纯化后的检测。

3.2 表达系统  

采用HEK293哺乳动物细胞表达，确保蛋白获得正确的翻译后修饰。OX40L为N-糖基化蛋白，糖链对受体结合亲和力有重要影响。SDS-PAGE中该蛋白表观分子量高于理论值（18 kDa），即为糖基化的典型特征。

3.3 纯度  

SDS-PAGE鉴定纯度≥90%，确保下游结合实验的背景信号最低化。

3.4 缓冲体系  

组成为8 mM磷酸盐（pH 7.4）、110 mM NaCl、2.2 mM KCl、20%甘油。生理pH和盐浓度维持蛋白天然构象，甘油支持长期低温稳定性。

4. 使用与保存指南

4.1 操作步骤  

1. 冰上解冻，轻柔混匀（严禁涡旋振荡——细胞因子对剪切力敏感，涡旋可导致聚集失活）；  

2. 解冻后快速离心（10,000×g，10秒）收集管壁液滴；  

3. 按单次用量分装，液氮速冻后转回-80°C长期保存；  

4. 避免反复冻融（每轮冻融可致活性损失10–20%）。

4.2 应用建议  

受体结合分析（ELISA/AlphaLISA）：将OX40L包被或固定在微孔板上，加入系列稀释的生物素化OX40受体，以HRP-Streptavidin检测结合信号。阳性对照可使用抗OX40L中和抗体阻断结合。建议使用BPS Bioscience #72045 OX40:OX40L抑制剂筛选试剂盒进行标准化操作。  

抑制剂/中和抗体筛选：设置OX40L-OX40结合反应体系，加入梯度稀释的待测化合物或抗体，以阻断率为指标评价抑制效能。预孵育步骤（OX40L+抑制剂，室温，30分钟）后加入OX40受体启动结合反应。  

表面等离子共振（SPR）：将OX40L固定在CM5或NTA传感器芯片上（利用His标签定向捕获），分析OX40受体或候选药物的结合动力学（ka、kd、Kd）。10×His标签增强的固定效率可提高SPR信号强度。  

细胞学功能验证：将OX40L与T细胞共培养体系中加入，检测OX40下游信号（如NF-κB活化、IL-2产生）或T细胞增殖情况，评估批次间生物活性的一致性。

5. 注意事项

运输与接收：干冰运输，到货后立即存入-80°C。避免存放于自动除霜冰箱。  

糖基化影响：不同表达批次间糖基化模式可能存在轻微差异，如实验对糖型一致性要求极高（如糖基化依赖性结合研究），建议批量采购以降低批次间变异。  

His标签干扰：10×His标签带强正电荷，可能影响某些实验（如等电聚焦或某些离子交换层析）。若需切除标签，本产品不含蛋白酶切割位点，需使用Ni-NTA结合后竞争性洗脱保留标签形式使用。  

安全性：仅供研究用途（Research Use Only），操作时遵循标准实验室规范。

6. 参考文献

1. Linton, P.J., et al., J. Exp. Med. 2003; 197(7): 875-883.

2. Arestides, R.S.S., et al., Eur. J. Immunol. 2002; 32(10): 2874-2880.