PD-L1/TCR激活剂-CHO重组细胞系：细胞培养协议方案

PD-L1/TCR激活剂CHO重组细胞系是组成型表达人PD-L1的CHO-K1细胞系（程序性细胞死亡1配体1、CD274或B7同源物1（B7-H1），GenBank登录号NM_014143）和工程TCR（T细胞受体）激活剂。

在共培养试验中，该细胞系用抗PD-1和抗PD-L1中和抗体进行了功能验证。

艾美捷PD-L1/TCR激活剂-CHO重组细胞系（#60536）：

细胞培养协议

细胞解冻

1. 从液氮储存中取出一个细胞瓶，保持在干冰上直到准备解冻。

2. 准备解冻时，将冷冻细胞瓶在37°C水浴中轻轻摇动约60秒。一旦细胞解冻（可能比60秒稍快或稍慢），立即将瓶内全部内容物迅速转移到一个空的50 ml锥形管中。

**注意：细胞在37°C水浴中停留过久会导致活力迅速丧失。

3. 使用10 ml的血清学移液管，将10 ml预热的解冻培养基3缓慢加入含有细胞的锥形管中。解冻培养基3应逐滴加入，同时轻轻摇动锥形管以允许温和混合，避免渗透性冲击。

4. 立即以300 x g离心5分钟，移除培养基，用5 ml预热的解冻培养基3重悬细胞。

5. 将重悬的细胞转移到T25瓶或T75瓶中，在37°C、5% CO2培养箱中培养。

6. 培养24小时后，检查细胞的贴壁和活力情况。更换为新鲜的解冻培养基3，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好进行传代。

7. 细胞应在完全汇合前进行传代。在第一次传代及后续传代中，使用生长培养基3A。

细胞传代

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞，并用0.25%胰蛋白酶/EDTA将细胞从培养容器中分离。

2. 细胞脱落后，加入生长培养基3A并转移到试管中。

3. 以300 x g离心5分钟，移除培养基，用生长培养基3A重悬细胞。

4. 按推荐的传代比例1:10至1:20每周两次接种到新的培养容器中。

细胞冻存

1. 吸去培养基，用不含Ca2+/Mg2+的PBS洗涤细胞，并用0.25%胰蛋白酶/EDTA将细胞从培养容器中分离。

2. 细胞脱落后，加入生长培养基3A并计数细胞。

3. 以300 x g离心5分钟，移除培养基，用4°C的细胞冻存培养基（BPS Bioscience #79796）重悬细胞，浓度约为2×10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml细胞悬液分装到每个冷冻管中，将试管放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下过夜保存。

5. 第二天将试管转移到液氮中进行长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞，并至少冻存10管以备后续使用。

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