尿液肌酐比色检测试剂盒--肾小球滤过率评估工具

一、产品背景与原理

肌酐是肌酸和磷酸肌酸的降解产物。肌酸/磷酸肌酸-肌酸激酶反应为骨骼肌、大脑等快速消耗ATP的组织提供能量来源。肌肉中的肌酸和磷酸肌酸以恒定速率经非酶促不可逆反应生成肌酐，随后进入血液循环并转运至肾脏，最终通过尿液排出体外。

肌酐的生成量与个体的肌肉质量成正比，因此尿液肌酐浓度常被用于校正尿样中其他分析物的检测数据（如激素、代谢物等的浓度归一化）。更为重要的是，肌酐清除率可作为肾小球滤过率（GFR）的评估指标，广泛应用于肾功能评价、肾损伤程度监测及肾脏疾病筛查。

本试剂盒不适用于人类或兽医临床诊断用途，仅限于科研实验。

二、检测原理

由艾美捷代理Cayman推出的尿液肌酐比色检测试剂盒（货号：500701）采用经典的Jaffe反应：肌酐与碱性苦味酸反应生成黄/橙色络合物，该颜色在酸性条件下被破坏。通过测定酸化前后在500 nm波长处的吸光度差值，即可消除样品中非肌酐来源的干扰色，该差值大小与样品中肌酐浓度成正比。样品肌酐浓度通过标准曲线（检测范围0-15 mg/dl）进行定量。

三、试剂盒储存与稳定性

组分 | 储存条件

Creatinine Standard（肌酐标准品） | 4°C

其余试剂 | 室温（18-26°C）

请于包装标注的有效期内使用，并确保按上述条件储存，否则可能影响试剂盒性能。

四、需自备的实验材料

1. 酶标仪：可读取490-500 nm吸光度

2. 轨道微板振荡器（孔板摇床）

3. 可调移液器和重复移液器

4. 纯水：玻璃双蒸水或HPLC级纯水（去离子水或Milli-Q级水也可接受）

5. （建议）UltraPure Water：具体请参阅试剂盒说明书确认是否必需

五、实验操作流程

步骤1：标准品加样

取15 ?l各浓度肌酐标准品（A-H管），分别加入标准品孔（按说明书推荐的96孔板布局操作）。

步骤2：样品加样

每份待测样品取15 ul，加入样品孔（建议做复孔以保证重复性）。

关键：样品肌酐浓度应落在标准曲线范围内。若预估浓度过高，请用纯水适当稀释后重新测定，否则超出线性范围的检测值不可信。

步骤3：显色启动

向所有待测孔中加入150 ul碱性苦味酸溶液，启动Jaffe反应。

步骤4：初次孵育

盖上板盖，置于孔板摇床上室温振荡孵育10分钟。

步骤5：初始吸光度读取

取下板盖，使用酶标仪在490-500 nm波长下读取吸光度，记录为初始吸光度值（A?）。

步骤6：酸化处理

向所有待测孔中加入5 ?l酸溶液。

步骤7：二次孵育

再次盖上板盖，室温振荡孵育20分钟。

步骤8：终末吸光度读取

取下板盖，再次于490-500 nm波长下读取吸光度，记录为终末吸光度值（A2）。

六、数据处理与计算

1. 计算每个孔的吸光度差值：ΔA = A1 - A2（酸化前后差值）。

2. 以标准品浓度为横坐标，对应ΔA值为纵坐标，绘制标准曲线（线性拟合或四参数拟合）。

3. 将样品孔的ΔA代入标准曲线方程，计算出样品中肌酐浓度（mg/dl）。

4. 若样品预先稀释，需乘以稀释倍数。

七、质量控制要点

标准曲线每次实验均需新鲜配制并行测定，不可使用历史曲线代替。

复孔要求建议标准品和样品均设复孔，复孔CV值应＜10%。

样品稀释：若样品ΔA值高于最高标准品（15 mg/dl），需用纯水稀释后重测。

本底扣除：酸化后仍可能残留少量非肌酐颜色，因此必须使用ΔA（酸化前后差值）进行定量，不可仅用A1读数。

八、文献参考

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