Cell Meter线粒体羟自由基检测试剂盒，1小时快速孵育，高特异性识别·OH

一、羟基自由基检测的生物学意义

羟基自由基（·OH）是活性氧家族中反应活性最强的成员之一。在细胞氧化代谢过程中，羟基自由基通常被视为有害副产物，其过量产生可导致生物大分子的氧化损伤。研究表明，羟基自由基能够攻击几乎所有类型的生物分子，包括核DNA、线粒体DNA、蛋白质及膜脂质。由于其在细胞内半衰期极短（平均约10^-9秒），如何实现快速、特异的检测成为氧化还原生物学研究的关键技术难点。

准确检测细胞内羟基自由基水平，对于理解正常细胞氧化还原调控机制、揭示其失调与各类疾病（如神经退行性疾病、缺血再灌注损伤、炎症及肿瘤发生）的关联具有重要意义。

二、AAT Bioquest检测试剂盒方案

为解决羟基自由基检测中灵敏度与特异性的技术挑战，由艾美捷代理的AAT Bioquest公司开发了Cell Meter?线粒体羟基自由基检测试剂盒（货号16055）。该试剂盒专用于活细胞线粒体内羟基自由基的靶向检测。

2.1 核心探针：MitoROS? OH580

该试剂盒的核心成分为MitoROS? OH580探针。其技术特点如下：

活细胞通透性：探针可直接穿透细胞膜，无需额外透化处理

线粒体靶向性：能够特异性富集于线粒体，实现亚细胞定位检测

选择性反应：仅与羟基自由基反应生成红色荧光产物

快速响应：孵育时间仅需1小时

2.2 试剂盒组分（200次检测规格）

组分编号 成分名称 规格

组分A MitoROS? OH580 1管

组分B 检测缓冲液 1瓶（50 mL）

组分C DMSO 1管（100 ?L）

三、光谱特性与仪器设置

3.1 荧光光谱参数

激发峰（Excitation）：576 nm

发射峰（Emission）：598 nm

3.2 不同检测平台的参数设置

荧光显微镜检测：

推荐滤光片组：Cy3 / TRITC滤光片组

激发与发射通道：使用相同滤光片组

荧光微孔板读取：

参数 设定值

激发波长 540 nm

发射波长 590 nm

截止滤光片 570 nm

读取模式 底部读取模式

推荐耗材：

孔板类型：黑壁/透明底板（以减少孔间串扰并允许底部读取）

四、实验操作流程

4.1 操作步骤概要

1. 探针配制：使用提供的DMSO溶解MitoROS? OH580探针

2. 细胞准备：将待测细胞接种于黑壁透明底板中

3. 探针加载：在检测缓冲液中加入探针，与细胞共孵育1小时

4. 信号检测：根据所用仪器平台进行荧光读取或成像

4.2 实验注意事项

操作过程中需避光，防止探针光漂白

建议设置阳性对照（如使用羟基自由基发生系统）和阴性对照

检测缓冲液应在实验前恢复至室温

五、储存、安全与操作规范

5.1 储存条件

试剂盒应按照各组分要求妥善保存，避免反复冻融。

5.2 安全标识

项目 信息

危险代码 XN（有害）

H术语 H303（吞咽可能有害）、H313（皮肤接触可能有害）、H333（吸入可能有害）

R术语 R20（吸入有害）、R21（皮肤接触有害）、R22（吞咽有害）

5.3 使用限制

研究用途：仅供研究使用（Research Use Only, RUO），不适用于临床诊断

UNSPSC代码：12352200（实验室试剂与化学品）

六、技术优势总结

Cell Meter?线粒体羟基自由基检测试剂盒的核心功能优势体现在以下方面：

1. 高灵敏度：荧光法检测，信号响应快速

2. 亚细胞定位：线粒体特异性靶向，实现原位检测

3. 操作简便：一步孵育，1小时完成探针加载

4. 平台兼容：同时支持荧光显微镜成像与微孔板定量检测

5. 活细胞检测：无需裂解细胞，保持生物学完整性

七、应用场景建议

该试剂盒适用于以下研究领域：

线粒体氧化应激机制研究

药物诱导的线粒体毒性评估

抗氧化剂筛选与效能评价

疾病模型中氧化还原失衡的机制探索

细胞凋亡与坏死过程中羟基自由基动态监测

如需开展上述实验，请根据所用检测平台选择相应的仪器参数，并严格遵守安全操作规程。

文献参考：

View all 47 references: Citation Explorer

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