KLH IgG(小鼠)ELISA试剂盒，用于快速定量小鼠抗KLH IgM水平

测量KLH（匙孔血蓝蛋白）诱导的抗KLH抗体水平可以定量评估免疫反应（参考文献1）。本ELISA试剂盒用于快速定量测量血清或血浆中的小鼠抗KLH IgG水平。另一款配套的ELISA试剂盒，货号KA2461，用于测量小鼠抗KLH IgM水平。

KLH IgG（小鼠）ELISA试剂盒用于定量测量血浆和血清中的KLH IgG。

艾美捷KLH IgG(小鼠)ELISA试剂盒：

货号：KA2460

校准范围：6.25至100 ?g/mL

适用样本：血浆、血清

样本体积：100 ?L

标记：HRP结合物

检测方法：比色法

监管状态：仅供研究使用（RUO）

测定类型：定量

反应性：小鼠

应用：定量

储存说明：将冻干标准品储存于-20℃。将所有其他组分储存于4℃。

仅供研究使用（RUO）

测定原理：

KLH IgG（小鼠）ELISA试剂盒基于固相酶联免疫吸附测定（ELISA）。该测定使用KLH进行固相（微孔板孔）固定，以及辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗小鼠IgG抗体进行检测。将测试血清或血浆样本稀释后，在微孔板孔中孵育1小时。随后洗涤微孔板孔，加入HRP结合物并孵育45分钟。抗KLH IgG分子因此被固定化的KLH和检测抗体结合物夹在中间。然后洗涤孔以去除未结合的HRP标记抗体，并加入TMB试剂，在室温下孵育20分钟。这将导致蓝色颜色的产生。通过加入终止液停止颜色发展，颜色变为黄色。在450 nm处用分光光度计测量吸光度。抗KLH IgG的浓度与测试样本的吸光度成正比。

储存说明：

参考标准品应储存于-20℃以保持最佳稳定性。

所有剩余试剂盒组分应储存于4℃。

微孔板应与干燥剂一起密封保存，以尽量减少暴露于潮湿空气。

如果按照上述说明储存，试剂盒自购买之日起六个月有效。

所需材料但未提供：

精确移液器和枪头

蒸馏水或去离子水

聚丙烯或玻璃管

涡旋混合器

吸水纸或纸巾

微孔板孵育/振荡器，混合速度为150 rpm

平板洗涤器

具有0-4吸光度范围的450 nm平板读数器

图表纸（可选PC绘图软件）

使用注意事项：

一般说明

仅供研究使用，不用于诊断目的。

在使用试剂盒之前，请仔细阅读并理解说明书。

本试剂盒旨在测量免疫KLH后14天获得的小鼠血清或血浆中的抗KLH IgG水平。

所有试剂在使用前应放置至室温（25℃）。

应通过实验确定最佳样本稀释度。然而，研究表明，对于大多数14天后免疫样本，初始样本稀释度为20,000倍效果良好。请勿使用小于25倍的稀释度。

如果在每个步骤中，试剂在5分钟内加入微孔板的孔中，则可获得最佳结果。

操作限制：

当按照详细说明完整理解并执行测定程序时，将获得可靠且可重复的结果。

洗涤步骤至关重要。洗涤不足会导致精密度差和吸光度读数虚高。

试剂准备：

洗涤液准备

提供的洗涤液为20倍浓缩液。使用前，将瓶中内容物（50 mL）与950 mL蒸馏水或去离子水稀释。

标准品准备

小鼠抗KLH IgG标准品为冻干储备液。用100 μL蒸馏水或去离子水复溶（复溶后的标准品在4℃下稳定一周，但如需日后使用，应分装并冷冻于-20℃）。

标记5个聚丙烯或玻璃管，分别为100、50、25、12.5和6.25单位/mL（u/mL）。

在标记为100 u/mL的管中，加入抗KLH IgG标准瓶标签上详细说明的稀释液体积。然后加入指示体积的抗KLH IgG标准品（显示在抗KLH IgG标准瓶标签上）并轻轻混合。这提供了100 u/mL的标准品。

向标记为50、25、12.5和6.25 u/mL的管中各加入250 μL稀释液。

通过将100 u/mL标准品250 μL与标记为50 u/mL的管中的250 μL稀释液混合稀释，制备50 u/mL标准品。

同样通过连续稀释法制备25、12.5和6.25 u/mL的标准品。

样本准备：

一般说明：研究表明，KLH免疫小鼠血清中抗KLH IgG的浓度约为750,000 u/mL。为了获得在标准曲线范围内的数值，我们建议样本初次稀释20,000倍，使用以下程序对每个待测样本进行操作：

分别向不同的管中加入248 μL和318 μL稀释液。

将2 μL血清样本加入含有248 μL稀释液的管中，混匀。这提供了125倍稀释的样本。

将2 μL 125倍稀释的样本与第二管中的318 μL稀释液混合。这提供了样本的20,000倍稀释。

对每个待测样本重复此程序。

标准曲线仅用于说明，不应用于计算未知量。每次进行测定时，应生成标准曲线。

文献参考：

1. Wada H, Noguchi Y, Marino MW, Dunn AR and Old LJ. T-cell functions in granulocyte/macrophage colony-stimulating factor deficient mice. Proc Natl Acad Sci. 94:12557-61 (1997).