Alpha Diagnostic International（ADI）细菌脂多糖 （LPS） 提取试剂盒（最多 50 个样品）使用前的注意事项

脂多糖（LPS），也称为脂多糖，是由脂质和多糖通过共价键连接而成的大分子；它们存在于革兰氏阴性细菌的外膜中，作为内毒素，能在动物中引起强烈的免疫反应。LPS是革兰氏阴性细菌细菌细胞壁的主要成分，对细菌的结构完整性贡献巨大，保护膜免受某些类型的化学攻击。LPS还增加了细胞膜的负电荷，有助于稳定整体膜结构。它对革兰氏阴性细菌至关重要，如果发生变异或被移除，它们将死亡。LPS是一种内毒素，能引起正常动物免疫系统的强烈反应。它还涉及细菌生态学的非致病方面，包括表面粘附、噬菌体敏感性和与捕食者（如阿米巴）的相互作用。LPS对于Omptin活性的正确构象是必需的；然而，平滑LPS会立体阻碍omptins。LPS作为典型的内毒素，因为它结合了CD14/TLR4/MD2受体复合物，这促进了多种细胞类型中促炎细胞因子的分泌，尤其是在巨噬细胞和B细胞中。在免疫学中，“LPS挑战”一词指的是将受试者暴露于可能作为毒素的LPS的过程。LPS也是一种外源性致热原（外部发热诱导物质）。由于对革兰氏阴性细菌至关重要，这些分子成为新抗菌剂的候选靶点。

热苯酚水提取法通常用于提取LPS，但耗时长，程序复杂。当我们试图操纵如此少量的细胞时，该方法有主要局限性。LPS提取试剂盒旨在快速、方便地从细菌细胞中微量提取LPS，广泛适用于不同的革兰氏阴性细菌，适用于少量细胞。

第1步：裂解

细菌细胞通过有机溶液裂解。细胞膜的磷脂和蛋白质组分被破坏，细胞组分释放到溶液中。

第2步：LPS纯化

在高盐浓度溶液中纯化LPS。

第3步：洗涤和洗脱

通过洗涤步骤短暂去除盐分，以获得高质量的LPS。

作为Alpha Diagnostic International（ADI）在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐Alpha Diagnostic International（ADI）热销产品细菌脂多糖 （LPS） 提取试剂盒（最多 50 个样品）。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

细菌脂多糖 （LPS） 提取试剂盒（最多 50 个样品）使用前的注意事项

1. LPS提取的产量与培养体积的增加成正比。当使用5毫升培养物时，LPS的产量最大。我们不推荐处理超过5毫升的细菌培养物。如果使用过量的培养体积，裂解将效率低下，产量将减少，细胞蛋白对LPS的污染将增加。通常，最佳培养体积为2毫升，OD为0.8-1.2。

2. 要从细菌细胞中获得更高纯度的LPS，按照以下程序用蛋白酶K处理提取的LPS。

LPS提取程序

步骤

1. 在室温下以13,000rpm离心，收集2-5毫升的细菌细胞。

注意：去除所有上清痕迹。对于沉淀的细胞，在使用前通过反复敲击管子彻底松动细胞团。细胞团未完全松动可能导致裂解效率低下和产量减少。

2. 加入1毫升裂解缓冲液并剧烈涡旋。注意：为了提高细菌细胞的裂解，直到细胞团消失为止，要剧烈涡旋。

3. 加入200微升氯仿后，剧烈涡旋10-20秒。并在室温下孵育5分钟。注意：在涡旋前观察管子。当加入氯仿时，会看到一条白线在上层（蓝色层）下方形成，因为氯仿层向下移动。这个区域包含细胞碎片、蛋白质和基因组DNA和RNA的混合部分。加入氯仿的目的是将苯酚层与水层分离，最终分离RNA和基因组DNA/蛋白质。

4. 在4℃下以13,000rpm离心10分钟。将400微升上清转移到新的1.5毫升管中。

注意：在吸取上层时，注意不要形成任何白色沉淀。

5. 加入800微升纯化缓冲液并混合均匀。在-20℃下孵育10分钟。注意：这一步的目的是纯化LPS，使其与其他细胞提取物（例如蛋白质、核酸、脂质等）分离。

6. 在4℃下以13,000rpm离心溶液15分钟后，去除上层以获得LPS沉淀。

7. 加入1毫升70%乙醇，通过倒置管子2-3次洗涤LPS沉淀。在4℃下以13,000rpm离心混合物3分钟。丢弃上层并干燥剩余的LPS沉淀。注意：这是洗涤阶段，以去除盐分等杂质。在室温下干燥沉淀。

8. 向LPS沉淀中加入30-50微升10mM Tris-HCl缓冲液（pH 8.0），并通过涡旋或吸取使其溶解。并通过煮沸2分钟完全溶解LPS。

注意：要从细菌细胞中获得更高纯度的LPS，用蛋白酶K处理提取的LPS。每1微克LPS处理2.5微克蛋白酶K，并在50℃下孵育30分钟。

Alpha Diagnostic International（ADI）公司于1993年成立， 是一家美国私营生物技术公司，总部位于德克萨斯州圣安东尼奥，具有USDA认证的动物试验设施。公司致力于开发、制造和供应新型诊断和质量控制试剂及检测试剂盒，用于人类和动物的基础生物学和疾病研究。同时，还提供多肽合成定制服务和多抗产品以及其他抗体相关服务，例如纯化亲和素，酶耦联物，染料，荧光染料等。ADI旨在准确了解科学研究人员和诊断测试界的需求，并迅速提供有效的解决方案，成为科学界值得信赖的创新试剂和解决方案提供商。

艾美捷科技是Alpha Diagnostic International（ADI）的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。