在免疫学实验(如免疫组化、免疫荧光及ELISA)中,高背景噪声是影响结果准确性与清晰度的常见问题。这种背景干扰主要源于抗体与样本中非目标蛋白的非特异性结合,或通过Fc受体与细胞表面产生的相互作用。为解决这一难题,使用正常血清作为封闭剂已成为一项关键且有效的步骤。本文将详细介绍正常血清,特别是正常驴血清(货号:017-000-121)的特性、制备方法、应用指南与储存规范,以帮助研究者优化实验流程。
Jackson 总部位于美国宾夕法尼的兰卡斯特,距离费城大概有40英里。Jackson在1982年由科学家展开了包括在细胞生物学,蛋白质化 学,微生物学,免疫学及产品开发实验研究。 Jackson产品仅用于研究,不用于诊断或治疗用途。作为美国各种二抗生产公司之一,Jackson在各国设有几十家代理。由于其产品效价 高、种类全、价格低廉,因而成为各大药厂、试剂盒生产厂、大型实验室采购此类试剂的优选选。其产品主要包括:各种纯化的二抗、标记的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、长臂生物素、辣根酶和碱磷酶标记)等。

一、产品概述与制备工艺
正常血清并非指“普通”血清,而是指从未经免疫的动物体内采集的血清,因此不含针对特定抗原的高水平抗体。其核心作用在于作为通用的封闭试剂,预先占据样本中可能发生非特异性结合的位点。
为确保产品的纯净度与稳定性,这类血清通常经过一系列严谨的工艺处理:
*脂质提取:通过去除血清中的脂质成分,显著提高液体的澄清度,减少杂质干扰,确保实验背景的洁净。
*透析处理:将血清置于含有叠氮钠的磷酸盐缓冲液中进行透析,以置换掉血清中原有的盐分和小分子物质,使其环境更接近生理条件,同时叠氮钠作为防腐剂抑制微生物生长。
*冻干成型:最终产品经过冷冻干燥处理,转化为固态粉末。这种形式J大地延长了产品的保质期,并便于运输和储存。
正常驴血清正是基于上述标准流程制备的高品质产品,其宿主来源为驴,未与任何分子偶联,适用于以驴血清作为封闭剂的多种免疫学检测体系。
二、核心应用:作为封闭剂的使用指南
封闭是免疫染色实验中至关重要的一步,其效果直接决定了实验的信噪比。
*推荐浓度:强烈建议使用5%(v/v)的正常血清溶液进行封闭。这相当于将复水后的100%血清进行1:20的稀释。
*选择同源血清的重要性:为了达到最佳的封闭效果,应选择与您所使用的标记二抗宿主来源相同的正常血清。例如,如果您的一抗来源于兔,而二抗是驴抗兔IgG,那么最理想的封闭剂就是正常驴血清。这是因为同源血清能最有效地封闭样本中可能存在的、能与二抗发生交叉反应的蛋白质,从而将背景降至最低。
*操作步骤:封闭应作为一个独立的孵育步骤,在加入一抗之前进行。将样本与5%的正常血清溶液在室温下孵育30-60分钟,即可有效阻断非特异性结合位点。
三、详细使用与储存规范
物理状态:本品为冻干固体。
储存与复水:
1.储存:未复水的冻干固体应置于2-8°C冷藏保存。
2.复水:使用前,请按照产品说明书指定的体积加入无菌去离子水,轻轻振荡使其充分溶解。若溶液不够澄清,可进行短暂离心取上清。
3.工作液配制:建议在实验当天将复水后的100%血清稀释至所需工作浓度(如5%)。
4.短期保存:复水后的原液(100%血清)在2-8°C下可稳定保存约6周。
长期保存与有效期:
1.分装冷冻:为了延长复水后产品的使用寿命,建议将其进行小量分装,并置于-20°C或更低的温度下冷冻保存。
2.避免反复冻融:反复冻融会导致血清中的蛋白质变性失活,严重影响封闭效果。因此,每次实验取用一管分装样品,解冻后勿再次冷冻。
3.有效期:从复水当天算起,产品的有效期为一年。如果经过测试,产品在特定应用中的性能仍可接受,此有效期可能延长。
安全提示:本品含有0.05%的叠氮钠作为防腐剂。叠氮钠有毒,操作时应佩戴适当的防护装备。含叠氮钠的废液需按照当地法规进行妥善处理。
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