千倍亲和力,精准捕获多聚泛素化蛋白,赋能高质量科研数据
UM501M是LifeSensors推出的TUBE 1(串联泛素结合实体)磁珠试剂盒,专为高效分离多聚泛素化蛋白设计。其核心技术采用串联泛素结合域(TUBEs) ,通过四个泛素结合域(UBA)的协同作用,实现对多聚泛素链的亲和力比单UBA结构域提升高达1000倍(相比单结构域)。这种超强结合能力大幅减少背景噪音,显著提升实验精度,尤其适用于低丰度泛素化蛋白的富集。
技术优势:为何选择UM501M?
1. 千倍亲和力,极致灵敏度
通过多UBA结构域串联,UM501M对多聚泛素链的亲和力(K_D值低至0.66 nM)比单UBA域(K_D ≈ 800 nM)提升1200倍,显著优于传统方法,可捕获痕量目标蛋白。
·磁珠形式简化操作流程,兼容自动化平台,缩短实验时间。
2. 双重保护机制
·抑制去泛素化酶(DUBs):添加泛素醛抑制剂,阻断DUBs对泛素链的水解。
·阻断蛋白酶体降解:结合蛋白酶体抑制剂(如硼替佐米),结合后形成保护屏障,阻隔蛋白酶体对泛素化蛋白的识别,维持泛素化蛋白稳定性。
3. 广泛兼容性与高特异性
·适用于细胞裂解液、组织样本,兼容Western Blot、质谱分析。
·对K48/K63型多聚泛素链具同等高亲和力,且不结合NEDD8/SUMO化蛋白,确保结果特异性。
用高容量TUBE1富集裂解液中的多聚泛素化蛋白
应用案例:顶尖期刊的实证
1. 神经科学领域
·在亨廷顿病研究中,UM501M成功富集神经细胞中泛素化的亨廷顿蛋白(Htt),揭示其K48泛素化介导的蛋白酶体降解路径。
·应用于下丘脑室旁核(PVN)样本,解析血管紧张素II诱导的神经源性高血压中泛素化蛋白的作用。
·阿尔茨海默症:结合质谱技术,鉴定脑组织中的泛素化蛋白标志物。
2. 癌症研究
·UBXN2A-CHIP通路:在癌细胞中分离致癌蛋白Mortalin-2,证实UBXN2A通过K48泛素化促进其降解,为靶向治疗提供依据。
·2023年最新研究利用UM501M解析WRN蛋白的染色质关联降解通路,揭示PIAS4-RNF4-p97/VCP调控轴。
3. 氧化应激与免疫
·蛋白质氧化修饰:从细胞中同步分离泛素化与碳酰化蛋白,揭示氧化损伤与泛素化的关联。
·NF-kB免疫通路:在树突状细胞中高效富集泛素化UBC13,解析OTUB1调控的免疫应答机制。
4. 蛋白质质量控制
·结合质谱技术(如DIA模式),鉴定共翻译过程中的泛素化修饰,揭示错误折叠蛋白的监控机制。
·在线粒体自噬研究中,富集USP30抑制后的泛素化Parkin底物,推动神经退行性疾病治疗。
文献支持:技术可靠性的基石
·原理验证:Hjerpe等(2009)首次开发TUBE技术,证实其千倍亲和力及保护作用
·技术升级:Kim等(2011)定量泛素化蛋白质组研究中,磁珠富集显著提升检测灵敏度
·前沿应用:2024年综述强调TUBEs在神经退行性疾病研究中不可替代的价值
"UM501M磁珠解决了泛素化蛋白不稳定的痛点。我们在研究WRN蛋白降解时,仅用100 uL磁珠即从500 uL裂解液中高效捕获目标,Western Blot信号清晰无背景。"
——Fernando Rodriguez Perez团队(2023,Cell Reports)
技术里程碑:TUBE技术被《Nature》《Cell》等顶级期刊广泛引用,成为泛素化研究的金标准。
为何全球实验室选择UM501M?
从基础机制到疾病治疗,UM501M以千倍亲和力和双重保护成为泛素化研究的黄金标准。2011-2023年间,超50篇Nature/Cell子刊研究依托其技术可靠性
——选择UM501M,即是选择顶级期刊的通行证。
优化操作流程
样本处理:细胞裂解液与磁珠共孵育(4℃, 2-4小时)→磁力架分离→洗涤→洗脱。
图示:UM501M四步法简化流程,适配高通量研究。
兼容性:直接对接Western Blot、质谱或测序分析。
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