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铁死亡研究-实验流程产品匹配方案

发布者：艾美捷科技发布时间：2026-05-21

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铁死亡（Ferroptosis）研究 — 实验流程 × 产品匹配方案

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一个真实铁死亡课题的完整实验流程。

研究者在每个环节需要做什么、为什么做、用什么产品最合适.

客服热线：400-6800-868 | www.amyjet.com

客户课题场景设定

某肿瘤研究所课题组，欲探究 化合物X 是否通过铁死亡途径杀伤肝癌细胞，并揭示其分子机制。需要一套完整的铁死亡研究工具。

实验流程全景

1 第一阶段：细胞模型建立与死亡确认

2 ┌─────────────┐ ┌──────────────┐ ┌───────────────┐ ┌──────────────┐

3 │ 1.诱导铁死亡 │ → │ 2.细胞活力确认 │ → │ 3.铁死亡特异性验证│ → │ 4.排除凋亡 │

4 └─────────────┘ └──────────────┘ └───────────────┘ └──────────────┘

6 第二阶段：表型指标多维度检测

7 ┌──────────────┐ ┌──────────────┐ ┌───────────────┐ ┌──────────────┐

8 │ 5.脂质过氧化 │ → │ 6.ROS水平检测 │ → │ 7.GSH/GSSG检测 │ → │ 8.铁离子水平 │

9 └──────────────┘ └──────────────┘ └───────────────┘ └──────────────┘

11 第三阶段：分子机制验证

12 ┌──────────────┐ ┌──────────────┐ ┌───────────────┐

13 │ 9.铁死亡标志蛋白│ → │10.氧化损伤评估 │ → │11.抗氧化能力 │

14 └──────────────┘ └──────────────┘ └───────────────┘

16 第四阶段：体内验证（可选）

17 ┌──────────────┐ ┌──────────────┐

18 │12.动物模型 │ → │13.组织水平验证 │

19 └──────────────┘ └──────────────┘

第一阶段：细胞模型建立与死亡确认

环节 1：诱导铁死亡

客户此时在做什么？

用阳性药（Erastin/RSL3）和待测化合物X分别处理肝癌细胞，建立铁死亡模型，同时设置梯度浓度和时间点。

1.1 经典诱导剂

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
Erastin	Cayman	17754	铁死亡研究引用量第一的诱导剂。抑制System Xc-→GSH耗竭→脂质过氧化→铁死亡。机制最经典，审稿人最认可。
RSL3	Cayman	19288	Class Ⅱ FIN 代表，直接抑制GPX4，绕过GSH环节。与Erastin靶点互补，两条通路交叉验证更有说服力。

推荐用量：Erastin 5-20 μM，RSL3 0.1-1 μM，处理12-24 h → CCK-8检测IC??。

1.2 其他诱导剂（客户研究方向拓展）

诱导剂	品牌	货号	适用场景
IKE	Cayman	27088	System Xc-抑制，代谢稳定。若客户后续要做动物实验，必须换成IKE，Erastin体内不稳定。
FINO2	Cayman	25096	铁氧化+GPX4失活双机制。Nature文献验证。适合作为正交阳性对照。
青蒿素	Cayman	11816	铁氧化内过氧化物，铁死亡相关。若客户研究疟疾/肿瘤交叉方向。

选品逻辑：客户首次做铁死亡 → Erastin + RSL3 双药上路。

客户要做体内 → 加IKE。

客户要筛选新诱导剂 → +FINO2作为不同机制的阳性对照。

1.3 阳性药配备后的验证环节 — 抑制剂逆转

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
Ferrostatin-1 (Fer-1)	Cayman	17729	铁死亡确认的国际金标准。RTA类抑制剂，直接捕获脂质过氧自由基。如果Fer-1能逆转死亡，则可证实铁死亡。文献引用近千篇。
去铁胺 (DFO)	Cayman	14595	验证铁依赖性。DFO螯合游离铁，若DFO可阻止死亡→证实铁参与。与Fer-1互补验证。

实验设计提示：

组1：Control（DMSO溶剂对照）

组2：Erastin 10 μM（诱导组）

组3：Erastin 10 μM + Fer-1 1 μM（铁死亡逆转）

组4：Erastin 10 μM + DFO 100 μM（铁依赖性验证）

→ 若组3和组4细胞活力恢复 → 铁死亡

→ 若组3不恢复 → 可能不是铁死亡

环节 2：细胞活力确认

客户此时在做什么？

诱导处理后，先确认细胞确实死了、死到什么程度。用CCK-8做浓度梯度和时间梯度，拿到IC??和时间窗口。

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
超敏CCK-8	Biogradetech	D-AKE106	10000T大规格，性价比远超竞品。WST-8法，操作简单——加液→孵育→读板，半小时出结果。试剂稳定，-20°C保存12个月。

备选：若客户偏好经典MTT法 → AkrivisBio MA-0218（MTT细胞活力试剂盒）

若客户偏好MTS一步法 → AkrivisBio MA-0237（MTS细胞活力试剂盒）

环节 3：形态学验证 — 线粒体变化

客户此时在做什么？

铁死亡的特征性形态学变化是线粒体萎缩、脊消失/减少、膜密度增高。客户需要通过电镜或荧光成像观察线粒体形态是否与铁死亡一致。

说明：线粒体电镜观察是铁死亡形态学金标准，但不依赖特定试剂。荧光染料可作为辅助判断——铁死亡细胞的线粒体膜电位通常下降但不同于凋亡。

可选辅助工具：

产品	品牌	货号	用途
MITO-ID 线粒体膜电位试剂盒	Enzo	ENZ-51018	检测线粒体膜电位变化（区分凋亡vs铁死亡模式）

注意：线粒体膜电位检测不是铁死亡的特异性指标（凋亡也会下降），仅作为辅助判断。铁死亡下的线粒体变化特征是形态学（萎缩/脊消失），最可靠的手段是透射电镜。

环节 4：排除凋亡

客户此时在做什么？

核心问题：你怎么证明细胞死的是铁死亡而不是凋亡？

这是审稿人最常问的问题。必须用凋亡检测手段证明 "我们的细胞没有发生凋亡"。

4.1 经典双染法 — Annexin V / PI

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒	Biogradetech	D-AKE0002	流式双染，区分正常/早凋/晚凋/坏死四群。铁死亡细胞膜破裂表现为PI+为主，与凋亡（Annexin V+/PI-）模式明显不同。
Annexin V-AF488/PI凋亡检测试剂盒	Biogradetech	D-AKE0002	AF488比FITC光稳定性更好，适合显微镜长时间观察。

预期结果：铁死亡时 Annexin V?/PI+ 细胞比例升高（膜直接破裂），而凋亡时 Annexin V+/PI? 为主。

4.2 凋亡分子标志物 — Caspase活性

产品	品牌	货号	用途
Caspase抑制剂（Z-VAD-FMK）	通用	—	药理验证：Z-VAD不能阻止铁死亡

提示：如果客户发现 Z-VAD 能部分抑制死亡，说明可能存在凋亡和铁死亡的混合死亡模式，需要进一步分离。

4.3 DNA片段化 — TUNEL

产品	品牌	货号	用途
TUNEL凋亡检测试剂盒（绿）	Biogradetech	D-AKK2010	经典凋亡DNA断裂检测。铁死亡时无典型TUNEL阳性。
TUNEL凋亡检测试剂盒（红）	Biogradetech	D-AKK2011	红色荧光版，与绿色探针共染色不冲突。

第二阶段：表型指标多维度检测

环节 5：脂质过氧化检测 —— 铁死亡最核心指标

客户此时在做什么？

铁死亡的直接致死原因是脂质过氧化积累。这是整个课题最关键的检测指标，需要从多个角度交叉验证。

5.1 首选方法 — C11 BODIPY 581/591 荧光探针

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
C11 BODIPY 581/591	Cayman	27086	铁死亡脂质过氧化检测的绝对首选。原理：结构的丁间二烯基被Lipid ROS氧化后，发射峰从591 nm（红）→510 nm（绿）偏移。活细胞实时检测，流式+荧光显微镜通用。Nature/Cell/PNAS高频引用。稳定性≥4年。

选品理由 vs 竞品：

vs 普通ROS探针（DCFH-DA）：DCFH-DA测的是总ROS，不特异于脂质过氧化。C11 BODIPY 直测膜脂质过氧化——铁死亡的核心事件。

vs Liperfluo（同仁化学）：Liperfluo单通道检测，C11 BODIPY是比率型（红→绿偏移），比率型 = 自校正 = 更可靠。

C11 BODIPY是Cayman原创产品，品质和文献支撑无懈可击。

操作要点：

1 储备液：1 mg + 0.1983 mL DMSO → 10 mM，-20°C避光保存

2 工作液：2-10 μM 无血清培养基或PBS稀释

3 染色：室温30 min → PBS洗2次 → 流式（FITC通道/PE通道）或荧光显微镜

4 判读：绿/红比值↑ = 脂质过氧化加重 = 铁死亡

5.2 定量验证 — MDA/TBARS

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
TBARS (TCA法) 检测试剂盒	Cayman	700870	TCA沉淀法改进版，样本处理更简单（省去煮沸步骤），工作体积更小，适配96孔板。MDA是脂质过氧化的终产物，定量MDA = 铁死亡程度量化。Cayman TBARS是MDA检测的文献引用标杆。

选品逻辑：C11 BODIPY（活细胞、实时、定性+半定量） + TBARS（细胞裂解液/组织、绝对定量） = 互补金标准。

环节 6：ROS水平检测

客户此时在做什么？

脂质过氧化由活性氧（ROS）驱动。客户需检测细胞内总ROS水平，验证化合物X处理后ROS是否升高，以及升高程度与脂质过氧化是否一致。

6.1 基础检测 — 总ROS

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
ROS检测试剂盒（DHE探针）	Cayman	601290	含阳性对照（ROS诱导剂）+ 阴性对照（ROS清除剂），客户无需另配对照。DHE探针灵敏度优于DCFH-DA。
EZMeta ROS检测试剂盒（荧光法）	Biogradetech	D-AKC1910	DCFH-DA经典探针法，50T/100T可选。适合初次做ROS实验的客户，操作指引详尽。

两选一推荐：

客户预算宽松、要求高灵敏度 → Cayman 601290

客户预算有限、首次探索 → Biogradetech D-AKC1910

6.2 亚型细化 — 针对性ROS检测

客户在铁死亡研究中关注的关键ROS亚型：

羟基自由基（·OH）：铁催化Fenton反应（Fe?? + H?O? → Fe?? + ·OH + OH?），是铁依赖性脂质过氧化的关键物种

线粒体超氧化物（O??）：铁死亡时线粒体ROS爆发的主要来源

ROS亚型	推荐产品	品牌	货号
线粒体超氧化物	Cell Meter? 线粒体超氧化物检测试剂盒（绿）	AAT Bioquest	16060
羟基自由基	Cell Meter? 线粒体羟基自由基检测（红）	AAT Bioquest	16055
过氧化氢	Amplite? H?O?检测试剂盒（红）	AAT Bioquest	11501

选品逻辑：AAT Bioquest在ROS细分领域全球领先。Cayman做总ROS，AAT做亚型，两者互补。若客户需要深入解析ROS来源，AAT产品是不可替代的选择。

6.3 低氧+ROS双检 — Enzo独有

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
ROS-ID? 低氧/氧化应激检测试剂盒	Enzo	ENZ-51042	独有双色荧光——低氧（红）+ ROS（绿）一步双检。若客户研究肿瘤微环境（低氧区铁死亡），这款产品无可替代。兼容流式和荧光显微镜。

适用客户类型：肿瘤微环境研究、缺血再灌注、实体瘤铁死亡。如果客户的课题涉及"肿瘤内部低氧区域是否更易发生铁死亡"，必推此产品。

环节 7：GSH/GSSG检测

客户此时在做什么？

GSH耗竭是铁死亡的关键事件。System Xc-被抑制→胱氨酸进不来→GSH合成受阻→GPX4失活。

不仅要测总GSH下降，还要测GSSG比例上升（GSH被氧化为GSSG = 氧化应激加重）。

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
谷胱甘肽检测试剂盒	Cayman	703002	经典比色法，细胞/组织裂解液适用。铁死亡文献引用最多的GSH检测试剂盒。
GSH/GSSG比率检测试剂盒	AkrivisBio	MA-0227	同时测定GSH和GSSG，直接计算比率。还原型/氧化型比值下降=铁死亡发生的核心生化证据。

搭配建议：Cayman 703002 做总GSH定量（必备）+ AkrivisBio MA-0227 做GSH/GSSG比率（加分项）。如客户预算有限，MA-0227单独使用即可覆盖两个指标。

环节 8：铁离子水平检测

客户此时在做什么？

验证铁参与。铁死亡是铁依赖性的，细胞内游离铁升高是铁死亡的必要条件之一。客户需检测细胞内或组织中铁离子含量。

推荐产品

品牌

货号

为什么选它

Phen Green SK 双乙酸酯

Cayman

25393

活细胞荧光探针。铁离子结合后荧光淬灭，信号越低=铁越多。适合流式细胞术。

铁离子检测试剂盒（比色法）

Bioassay System

DIFE-250

组织/细胞裂解液铁含量定量。适合组织样本。

搭配建议：细胞实验 → Phen Green SK（25393）做流式；组织样本 → JaICA CFE-005做比色。

第三阶段：分子机制验证

环节 9：铁死亡标志蛋白检测

客户此时在做什么？

收集蛋白样品，跑Western Blot，检测铁死亡核心通路蛋白的表达变化。需要至少检测 GPX4、SLC7A11、ACSL4 三个核心指标。

9.1 方案一：Western Blot 逐条跑

靶标蛋白	推荐产品	品牌	货号	为什么选它
GPX4	GPX4兔多克隆抗体	Cayman	10006568	铁死亡核心抑制蛋白。GPX4下降=铁死亡发生。Cayman出品，同一品牌所有工具试剂一致性最好。
SLC7A11/xCT	SLC7A11抗体	Abbexa	多款	System Xc-亚基。Erastin靶点。Abbexa提供多克隆/单克隆/WB级/IHC级多种选择。
ACSL4	ACSL4抗体	Bethyl	A305-358A	PUFA-PL合成的关键酶，铁死亡促发因子。Bethyl抗体以高特异性和低背景著称。
TfR/CD71	TfR兔单克隆抗体	Cayman	32311	转铁蛋白受体，铁摄取。铁死亡时表达上调，反映铁超载。
Transferrin	Transferrin抗体(人)	Bethyl	A80-128A	铁转运蛋白。配合TfR检测完整的铁摄取通路。

9.2 方案二：ELISA批量筛选（强烈推荐）

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
铁死亡ELISA探索套装	Assay Genie	SKF10019	一个套装覆盖GPX4、SLC7A11、ACSL4、TFRC、FTH1、PTGS2六大标志物！48孔预包被板，4小时出结果。比逐个买ELISA省50%以上。

核心卖点：

6指标一步筛选，直接定位化合物X作用于哪条通路

适合"机制不清楚，先筛一遍"的场景

出厂预包被，无需优化条件

ELISA结果定量、标准化，比WB更适合发文章的数据呈现

搭配建议：先用Assay Genie SKF10019做ELISA批量筛选 → 锁定变化最显著的2-3个靶标 → 再用Cayman/Abbexa/Bethyl抗体做WB验证 → 既省时又严谨。

环节 10：氧化损伤评估

客户此时在做什么？

除了脂质过氧化，铁死亡产生的ROS也会攻击DNA和蛋白质。客户可能需要评估DNA氧化损伤和蛋白质氧化程度，为机制研究增加深度。

DNA氧化损伤

推荐产品	品牌	货号	为什么选它
8-OHdG ELISA试剂盒	Epigentek	P-6003	全球8-OHdG检测金标。全球领先的8-OHdG ELISA的公司，文献引用量第一梯队。DNA氧化损伤的标志性指标。
8-OHdG单抗	Abnova	MAB6116	用于组织切片的8-OHdG IHC染色。

蛋白质氧化

产品	品牌	货号
DiBrY（二溴酪氨酸）抗体	JaICA	JCA-MDB-030P
硝基色氨酸(NW)抗体	JaICA	JCA-MNT-040P
双酪氨酸(DT)抗体	JaICA	JCA-MDT-050P

环节 11：抗氧化能力与氧化还原状态

客户此时在做什么？

铁死亡本质是氧化-抗氧化失衡。除了检测GSH/GPX4等修复系统，还需要评估细胞整体的抗氧化能力和氧化还原状态。

检测指标	推荐产品	品牌	货号	为什么选它
总抗氧化能力	TAC检测试剂盒	BioAssay Systems	DTAC-100	客户细胞或组织的总体抗氧化能力评估。
NADP?/NADPH比率	NADP?/NADPH试剂盒	BioAssay Systems	E2NP-100	反映细胞氧化还原状态。NADPH是GSH再生的电子供体，NADPH↓→GSH无法再生→铁死亡。
SOD活性	SOD活性检测试剂盒	AkrivisBio	MA-0108	超氧化物歧化酶，抗氧化第一道防线。
Catalase活性	Catalase活性检测试剂盒	AkrivisBio	MA-0143	过氧化氢酶，清除H₂O₂。配合铁死亡研究验证为何H?O?积累。

环节 12：动物实验 — 体内验证（客户进阶需求）

客户此时在做什么？

体外实验完成后，需要在动物模型上验证。客户最关心的是：

用什么药？—— E/IKE比Erastin代谢稳定

怎么给药？—— i.p.注射

检测什么指标？—— 血清/组织中的脂质过氧化和铁死亡标志物

12.1 体内诱导与抑制

环节	推荐产品	品牌	货号	为什么选它
体内诱导	IKE	Cayman	27088	Erastin体内代谢太快，IKE是专门为体内设计的稳定类似物。i.p. 10-50 mg/kg。
体内抑制	Liproxstatin-1	Cayman	17730	体内铁死亡抑制剂优选。i.p. 10 mg/kg。比Fer-1更稳定、体内活性更好。
铁螯合	DFO	Cayman	14595	i.p. 100 mg/kg，验证体内铁依赖性。

12.2 体内铁死亡指标检测 — 组织/血清/尿液

检测指标	推荐产品	品牌	货号	为什么选它
8-异丙前列腺素	8-Isoprostane ELISA	Cayman	516351	体内脂质过氧化金标准！比MDA/TBARS灵敏100倍以上，是铁死亡体内研究最能打动审稿人的指标。
MDA定量	TBARS Assay Kit	Cayman	10009055	组织匀浆MDA检测，经典补充。
GPX4蛋白	GPX4兔多抗	Cayman	10006568	肿瘤组织IHC染色，观察治疗后GPX4表达变化。
铁离子	铁离子检测试剂盒	Bioassay Systems	DIFE-250	血清或组织铁含量定量。

附录A：按客户场景选品速查

场景一：初次接触铁死亡（最小可行方案）

环节	产品	品牌	货号
诱导	Erastin	Cayman	17754
诱导	RSL3	Cayman	19288
逆转验证	Ferrostatin-1	Cayman	17729
铁依赖验证	DFO	Cayman	14595
细胞活力	超敏CCK-8	Biogradetech	D-AKE106
脂质过氧化	C11 BODIPY 581/591	Cayman	27086
排除凋亡	Annexin V-AF488/PI	Biogradetech	D-AKE0002

场景二：深入铁死亡机制

在场景一基础上增加：

环节	产品	品牌	货号
ROS	ROS检测(DHE)	Cayman	601290
GSH	谷胱甘肽检测试剂盒	Cayman	703002
GSH/GSSG	GSH/GSSG比率试剂盒	AkrivisBio	MA-0227
GPX4活性	GPX4检测试剂盒	Cayman	701880
MDA定量	TBARS (TCA法)	Cayman	700870
铁离子	Phen Green SK	Cayman	25393
标志蛋白ELISA	铁死亡ELISA套装	Assay Genie	SKF10019
GPX4 WB	GPX4兔多抗	Cayman	10006568

场景三：铁死亡+肿瘤微环境氧化应激

在场景二基础上增加：

环节	产品	品牌	货号
低氧+ROS双检	ROS-ID?试剂盒	Enzo	ENZ-51042
DNA氧化损伤	8-OHdG ELISA	Epigentek	P-6003
NADP?/NADPH	NADP?/NADPH试剂盒	BioAssay Systems	E2NP-100
总抗氧化	TAC试剂盒	BioAssay Systems	DTAC-100
SOD活性	SOD试剂盒	AkrivisBio	MA-0108
Catalase活性	Catalase试剂盒	AkrivisBio	MA-0143
NRF2/KEAP1通路	NRF2通路套装	Assay Genie	SKFI0034

场景四：铁死亡+体内动物实验

在场景二或三基础上增加：

环节	产品	品牌	货号
体内诱导	IKE	Cayman	27088
体内抑制	Liproxstatin-1	Cayman	17730
体内脂质过氧化	8-Isoprostane ELISA	Cayman	516351
组织氧化损伤	4-HNE IHC抗体	Abnova	MAB6116
组织铁含量	铁离子检测试剂盒	Bioassay System	DIFE-250

附录B：品牌角色定位

品牌	在铁死亡方案中的角色	一句话定位
Cayman Chemical	核心主力	铁死亡研究工具第一品牌——诱导剂/抑制剂/脂质过氧化探针/GSH/GPX4 全链路覆盖，文献支撑最强
Biogradetech	基础实操	CCK-8 / Annexin V / TUNEL / ROS(DCFH-DA) / MDA 性价比套装
AAT Bioquest	ROS亚型专家	线粒体超氧化物/羟基自由基/H?O?/过氧亚硝酸盐无一遗漏
JaICA	氧化损伤金标	8-OHdG全球标准、4-HNE/MDA/铁离子、独一无二
AkrivisBio	生化检测补充	GSH/GSSG比率/SOD/Catalase/NADP?-NADPH 灵活搭配
BioAssay Systems	氧化还原评估	NADP?/NADPH/TAC/GSH/GSSG 比色法成本低廉
Enzo	差异化利器	ROS-ID二合一（低氧+ROS），同行没有
Assay Genie	到货即用	ELISA探索套装，6指标一步筛选
Abnova	GPX4/SLC7A11抗体	铁死亡核心标志蛋白抗体
Bethyl	ACSL4/TfR/Transferrin抗体	高特异性铁死亡相关抗体
ICT	Annexin V补充	多物种Annexin V（牛/犬/鸡/马/猪/人）