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Norgen Biotek细胞质RNA和细胞核RNA实验操作指南

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-12-17     
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Norgen Biotek中国区独家总代理——艾美捷科技

细胞质和细胞核RNA提取试剂盒

Cytoplasmic & Nuclear RNA Purification Kit

 

货号:21000

悬浮细胞和被提起悬浮的细胞(For cells growing in suspension and lifted cells)

 

00:00~00:56

  • 您好,您正在收看Norgen Biotek。今天,我们将提供有关细胞质和细胞核RNA纯化试剂盒(产品货号:21000)的分步工作流程的教程,该教程适用于在悬浮细胞和被提起悬浮的细胞。

  • 为了避免样品污染,建议在开始前先用1%的漂白剂消毒工作区域和仪器,然后70%乙醇擦拭。

  • 您的试剂盒包括:详细的产品说明书,Lysis Buffer J(裂解缓冲液J),Buffer SK(缓冲液SK),Wash Solution A(洗涤液A),Elution Buffer E(洗脱液E),Spin Columns(离心柱),Collection Tubes(收集管)和1.7 mL Elution tubes(1.7 mL洗脱管)。

  • 在开始前,确保把Lysis Buffer J放在-20℃的冰箱中10到15分钟,并在使用前取出。这是为了确保细胞质和细胞核RNA的分离。


00:58

1步:细胞组分的制备

Step 1: Cell Fractions Preparation


01:02~02:55

  1. 将细胞悬液转移至无RNase的试管,并以不超过200 g或2000 RPM的速度离心10分钟以沉淀细胞。01:16~01:23

  2. 小心倒出上清液。为了确保沉淀物不会脱落,可能会在沉淀物中留下几微升的培养基。

  3. 在沉淀中加入200 uL冰冷的Lysis Buffer J。

  4. 通过涡旋15秒来裂解细胞。在进行下一步之前,请确保整个沉淀完全溶解。使用移液器将裂解液转移至无RNase的微量离心管。

  5. 在台式离心机中以最大速度旋转裂解液10分钟。

  6. 使用带有小枪头的移液器,将包含细胞质RNA的上清液转移至另一个无RNase的试管。

  7. 细胞核RNA组分(沉淀)非常粘稠,可能很松散,因此,强烈建议使用较小的移液器枪头来转移细胞质部分,避免将细胞核RNA组分(沉淀)移出或转移到细胞质部分中。

  8. 如果需要提取细胞核RNA,则保留含有细胞核RNA的沉淀。

  9. 为了确保沉淀微球不被移出,可以在沉淀物中留下几微升的Lysis Buffer J。立即继续执行步骤2。


02:58

第2A步:将细胞质RNA与柱结合

Step 2A: Binding Cytoplasmic RNA to Column

 

03:02~03:43

  1. 向前一步的上清液(细胞质RNA组分)中加入200 ?L Buffer SK。涡旋混合10秒钟。

  2. 向混合物中加入200 uL 96-100%乙醇。涡旋混合10秒钟。

  3. 将混合物加到已与收集管组装在一起的离心柱上,并以3500 g或6000 RPM离心1分钟。

  4. 丢弃流通液,重新组装离心柱及其收集管。


03:45

第2B步:将细胞核RNA与柱结合

Step 2B: Binding Nuclear RNA to Column

 

03:48~04:27

  1. 将400 uL Buffer SK添加到沉淀(细胞核RNA组分)中。涡旋混合10秒钟。

  2. 向混合物中加入200 uL 96-100%乙醇。涡旋混合10秒钟。

  3. 将混合物加到已与收集管组装在一起的第二个离心柱上,并以3500 g或6000 RPM离心1分钟。

  4. 丢弃流通液,重新组装离心柱及其收集管。


04:29

第3步:柱洗

Step 3: Column Wash

 

04:32~05:04

  1. 将400μL Wash Solution A加入离心柱并离心1分钟。

  2. 丢弃流通液。重复这一步骤两次,总共洗三次。

  3. 旋转离心柱2分钟,以彻底干燥树脂。丢弃收集管。


05:06

第4步:RNA洗脱

Step 4: RNA Elution

 

05:08~05:33

  1. 将离心柱放入试剂盒中提供的新的1.7 mL洗脱管中。将50 uL Elution Buffer E加到离心柱中。

  2. 以200 g或2000 RPM离心2分钟,然后以14000 g或14000 RPM离心1分钟。


05:36

第5步:RNA的保存

Step 5: Storage of RNA

 

05:39~05:49

纯化的RNA样品可以在–20°C下保存几天。建议样品应置于–70°C进行长期保存。


感谢您观看本教程,希望这个操作指南能够帮助到大家,如果你喜欢这个视频,欢迎大家踊跃分享它。

 

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