Agrisera PSII的VDAC1 |电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1说明书

背景资料 VDAC蛋白是通道蛋白型，β-桶扩散孔。主要定位于线粒体外膜，并参与代谢物交换。   

作为Agrisera全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Agrisera热销产品PSII的VDAC1 |电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

VDAC1 |电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1基本参数：

• 免疫原：在所有已知的高等植物VDAC蛋白中保守的KLH缀合肽，包括拟南芥VDAC1 UniProt:Q9SRH5，TAIR:AT3G01280，VDAC2 UniProt F4K3R8-1，TAIR:AT5G67500，VDAC3 UniProt:Q9SMX3-1，TAIR：AT5G15090，VDAC4 UniProt:Q.9FKM2-1，TAIR:AT5G57490，VDAC 5 UniProt:Q9M2W6-1，TAIR:AT3G49920

• 宿主：兔子

• 克隆性：多克隆

• 纯度：在pH 7.4的PBS中的免疫原亲和纯化血清。

• 格式化：冻干

• 数量：50?g

• 重组：为重组添加50?l无菌水

• 储存：在-20°C条件下冷冻干燥/复原储存；一旦复原，就制作等分试样，以避免重复的冻融循环。请记得在打开管子之前先短暂旋转管子，以避免材料粘附在管子的盖子或侧面可能造成的任何损失。

• 测试应用：蓝色天然PAGE（2D BN/SDS-PAGE），蛋白质印迹（WB）

• 推荐稀释度：1:500（IL），1:5000，2-30?g蛋白质/泳道（WB）

VDAC1 |电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1应用示例：

粗膜蛋白在12%SDS-PAGE上分离，并在PVDF上印迹1h。在室温下，在搅拌下，在50mM Tris、150mM氯化钠（pH 7.5）和0.1%（v/v）Tween-20（TBS-T）中转移5%封闭试剂（BioRad，170-6404）1小时后，立即封闭印迹。将印迹在1∶5000稀释的初级抗体中在4°C搅拌下孵育过夜。倾析抗体溶液，将印迹短暂漂洗两次，然后在室温下在TBS-T中搅拌洗涤3次，持续5分钟。将印迹在0.2%封闭溶液中稀释至1:5000的第二抗体（山羊抗兔IgG马萝卜过氧化物酶缀合物）中在室温下搅拌孵育1h。按照制造商的说明，如上所述洗涤印迹，并用化学发光检测试剂显影1~2分钟。使用CCD成像器（LAS4000GE）和ImageQuant软件（GE）获得印迹的图像。 

拟南芥膜提取和SDS–PAGE分析约200 mg（gFW）拟南芥幼苗（3周龄），生长在1%MS琼脂平板上，在2ml提取缓冲液[75mM MOPS-KOH，0.6M蔗糖，4mM EDTA，0.2%PVP-40，0.2%BSA，8mM L-半胱氨酸，pH 7.6]和来自Roche Diagnostics GmbH（德国曼海姆）的蛋白酶抑制剂混合物“complete Mini”的存在下，用研钵和研杵研磨。粗膜提取物的制备基本上如Colas des Francs Small等人（2012）所述。通过在4摄氏度下以22000g离心10分钟获得膜状部分。用洗涤缓冲液[37.5mM MOPS-KOH，0.3M蔗糖，2mM EDTA pH 7.6]洗涤含有粗膜部分的颗粒两次。样品在-80℃下冷冻，直到使用。对于SDS-PAGE，将相当于10mg（即1x稀释）的拟南芥粗膜提取物的等分试样溶解在3x莱姆利样品缓冲液（Bio-Rad）中，并通过SDS凝胶电泳分析蛋白质 

由以色列耶路撒冷希伯来大学奥伦·奥斯特策尔博士提供  

部分引用文献：

• Belykh et al. (2022) Responses of genes of DNA repair, alternative oxidase, and pro-/antioxidant state in Arabidopsis thaliana with altered expression of AOX1a to gamma irradiation. Int J Radiat Biol. 2022;98(1):60-68. doi: 10.1080/09553002.2022.1998712. Epub 2021 Nov 11. PMID: 34714725.

• Li et al. (2021) Isolation and comparative proteomic analysis of mitochondria from the pulp of ripening citrus fruit. Hortic Res. 2021 Feb 1;8(1):31. doi: 10.1038/s41438-021-00470-w. PMID: 33518707; PMCID: PMC7848011.

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