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如何检测蛋白是否泛素化?

发布者:艾美捷科技    发布时间:2020-07-21     
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继上周整理的泛素化蛋白快速富集纯化的解决方案后,最近又有客户问“我想在体外检测组织中的一个蛋白是否在处理因素作用后发生泛素化,请问有这方面的实验方法吗,或者试剂盒吗?”作为泛素研究领域的专家,LifeSensors可为您提供全面的泛素研究解决方案,如何鉴定靶蛋白是否发生泛素化修饰?你问了,我安排!

 

靶蛋白泛素化修饰.png

 

如何判断蛋白是否泛素化? 是哪种类型的泛素化修饰? UbiTest可以给您答案。

 

UbiTest检测原理:先通过TUBEs富集纯化样本中的泛素化总蛋白,随后,将分离到的泛素化蛋白经或者不经去泛素化酶DUBs处理,(+)/(-)DUBs处理的蛋白样本用靶蛋白的特异性抗体进行免疫印迹(WB)分析,通过条带比对分析实现对泛素化蛋白的定性及半定量检测。

 

UbiTest检测原理.png

 

UbiTest检测原理.png

 

实例分析==>

样本:Jurkat细胞裂解液

实验目的:MDM2和TNF-R1蛋白是否泛素化

实验流程:通过TUBEs富集纯化样本中的泛素化总蛋白,经去泛素化酶DUBs处理,后,用靶蛋白的特异性抗体进行WB检测

 

WB检测.png

 

检测抗体:MDM2抗体

Lane 1: 富集纯化的蛋白样本不经DUBs处理

Lane 2: 富集纯化的蛋白经广谱型的DUBs处理(可以去除所有类型的多聚泛素链)

Lane 3: 富集纯化的蛋白经特异性针对K48-泛素链的去泛素化酶处理(只能水解K48-泛素链)

 

结果:Lane 2的条带信号(~55kda)与Lane 1相比明显增强,说明MDM2被泛素化修饰了

Lane 3的条带信号(~55kda)与Lane 1相比有所增加,但是比Lane 2的信号明显减弱,说明特异性针对K48-泛素链的去泛素化酶并没有水解掉靶蛋白近端的泛素,或者说MDM2还存在其他连接类型的多聚泛素链。

 

TUBEs抗体检测.png

 

检测抗体:TNF-R1抗体

Lane 1: 富集纯化的蛋白样本不经DUBs处理

Lane 2: 富集纯化的蛋白经广谱型的DUBs处理(可以去除所有类型的多聚泛素链)

Lane 3: 富集纯化的蛋白经特异性针对K63-泛素链的去泛素化酶处理(只能水解K63-泛素链)

 

结果:Lane 2的条带信号(~50kda)与Lane 1相比明显增强,说明TNF-R1被泛素化修饰了

Lane 3的条带信号(~140kda)与Lane 1相比明显减弱,Lane 3的条带信号(~50kda)与Lane 1相比有所增强,说明TNF-R1的泛素化类型为K63,但是还存在其他类型的泛素化修饰,所以比Lane 2的信号弱很多。

 

货号名称产品说明
UM411UbiTest Agarose-TUBE Elution Kit鉴定靶蛋白是否泛素化
UM411MUbiTest Magnetic TUBE Elution Kit
UM413K63 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit鉴定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K63-泛素化修饰
UM413MK63 Linkage Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit
UM414K48 Linkage Specific UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit鉴定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K48-泛素化修饰
UM414MK48 Linkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit
UM412Linkage Profiling UbiTest – Agarose TUBE Elution Kit鉴定靶蛋白是否泛素化以及是否存在K63/K48-泛素化修饰
UM412MLinkage-Specific UbiTest – Magnetic TUBE Elution Kit


 

作为一家具有高端的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商优保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、开曼生物、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在短时间内为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品及物流服务。

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