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泛素化蛋白快速富集纯化黑科技—TUBEs

发布者:艾美捷科技    发布时间:2023-03-31     
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       泛素化是一种常见的调节蛋白的稳定性和功能的翻译后修饰。蛋白的泛素化需要3种酶的参与,分别是泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme,E1)、泛素偶联酶(ubiquitin conjugation enzyme,E2)和泛素连接酶(ubiquitin ligase,E3)。在3种酶的作用下,泛素(ubiquitin,ub)分子的C端羧基与底物蛋白赖氨酸(Lys)残基的?氨基形成酰胺异构肽。同时,泛素也能发生泛素化修饰形成不同的泛素链,而不同的泛素链又介导不同的生物功能。泛素化修饰不仅参与底物蛋白的26S蛋白酶体降解过程,还参与基因转录、细胞周期、DNA损伤和免疫应激等生物过程。大规模富集泛素聚合物是研究泛素化系统的关键技术。传统的富集泛素化蛋白的常用手段是标签富集或者高亲和力抗体富集,这种基于抗体的泛素蛋白质组学对于大规模泛素化系统的研究是非常昂贵的,而且,目前市面上大多数供应商出售的泛素抗体是非选择性的,无法满足研究学者的多样需求。

 

泛素化蛋白快速富集纯化

 

      泛素结合结构域(ubiquitin-binding domains,UBD)是一种可识别和结合泛素化修饰的蛋白小模块。根据结构域的不同可将UBD分为20个家族,这些UBD对泛素的亲和力不等(2~500umol),且存在泛素链的偏好性。UBD结合下的泛素化蛋白在胰蛋白酶的作用下,泛素化底物上的泛素化位点Lys由于泛素化产生一个带2个甘氨酸标签的分枝状漏切肽段,这2个甘氨酸标签是由于修饰的泛素分子的C末端通过异肽键与泛素化位点的Lys结合,经过胰蛋白酶消化后保留的残基。产生的信号肽在质谱信号中会产生一个114.043Da的质量跃迁,结合漏切的Lys位点,合称为GG-K信号肽,通过该信号肽结合数据库搜索引擎可实现对泛素化底物的鉴定。这也是高精度质谱技术实现泛素化底物鉴定的基础。

 

      基于UBD对泛素的高亲和力,泛素研究专家LifeSensors已开发出利用串联泛素结合实体(Tandem Ubiquitin Binding Entities,TUBE)从细胞和组织裂解液中特异性分离富集泛素化蛋白的技术。TUBEs由多个UBDs串联构成,对泛素链亲和性极高,而且,TUBEs通过与泛素链的结合可以保护蛋白质不被去泛素化,同时避免靶蛋白发生蛋白酶体介导的降解,为研究泛素化蛋白质组学提供了很好的工具。

 

      除了研发和生产可与所有类型的多聚泛素链结合的TUBE(pan-TUBE)之外,LifeSensors还开发了可选择性地与K48或K63或线性(M1)多泛素化蛋白结合的链特异性TUBE。

 

多泛素化蛋白结合的链特异性TUBE

 

      TUBE产品优势

       1.可快速有效的实现泛素化蛋白的富集和纯化

       2.比单个UBA结构域的亲和力高1000倍

       3.与泛素抗体相比有更高的特异性和亲和力

       4.保护蛋白质不被去泛素化,同时可避免靶蛋白发生蛋白酶体介导的降解

 

TUBE

 

      pan-TUBE——可与所有类型的多聚泛素链结合

 

标签类型货号名称
磁珠(Magnetic)UM401MTUBE 1 (Magnetic Beads)
UM402MTUBE 2 (Magnetic Beads)
琼脂糖珠(Agarose)UM401TUBE 1 (Agarose)
UM402TUBE 2 (Agarose)
生物素UM301TUBE 1 (Biotin)
UM302TUBE 2 (Biotin)
GSTUM101TUBE 1 (GST)
His6UM201TUBE 1 (His6)
HRPUM312TUBE 2 (HRP)
荧光(Fluorescein/Tamra)UM502FTUBE 2 (Fluorescein)
UM502TTUBE 2 (TAMRA)

 

      Selective TUBEs——与M1-线性多聚泛素链特异性结合

 

标签类型货号名称
His6UM206M1 TUBE (His6)
生物素UM306M1 TUBE (Biotin)
FLAGUM606M1 TUBE (FLAG)

 

      Selective TUBEs——与K48-多聚泛素链特异性结合

 

标签类型货号名称
磁珠(Magnetic)UM407MK48 TUBE HF (Magnetic Beads)
生物素UM307K48 TUBE HF (Biotin)
FLAGUM607K48 TUBE HF (FLAG)
His6UM207:K48 TUBE HF (His6)
GSTUM107K48 TUBE HF (GST)
荧光(Fluorescein/Tamra)UM507FK48 TUBE HF (Fluorescein)
UM507TK48 TUBE HF (TAMRA)

 

 

 

      Selective TUBEs——与K63-多聚泛素链特异性结合

 

标签类型货号名称
磁珠(Magnetic)UM404MK63 TUBE (Magnetic Beads)
生物素UM304K63 TUBE (Biotin)
FLAGUM604K63 TUBE (FLAG)
荧光(Fluorescein/Tamra)UM504FK63 TUBE (Fluorescein)
UM504TK63 TUBE (TAMRA)

 

 

      作为一家具有高端的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

      艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商优保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在短时间内为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品及物流服务。

 


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