欢迎您访问武汉艾美捷科技有限公司官方网站!
站点地图 服务热线:400-6800-868
  • 产品
  • 文章

PRODUCT CENTER

特色产品

当前位置:首页 > 特色产品

荧光信号放大:TSA优秀替代品—PSA技术

发布者:艾美捷科技    发布时间:2020-06-11     
分享到:

      Power Styramide™信号放大(PSA™)是一种新颖的酶检测信号放大方法,用于检测细胞和组织中的低丰度靶标。通过将iFluor™染料的卓越亮度和光稳定性与多HRP介导的PSA™成像相结合,可产生明亮的荧光信号,其准确性和灵敏度明显高于传统的免疫组织化学,免疫细胞化学和原位杂交技术。

 

       Power Styramide™信号放大PSA

 

       与酪酰胺信号放大(TSA)相似,PSA利用辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性原位共价沉积荧光团。 PSA自由基具有比酪胺自由基高得多的反应性,使得PSA系统比传统的TSA试剂更快,更稳健和灵敏。与酪胺试剂相比,Styramide 缀合物具有以更高效率标记靶标的能力,因此产生显着更高的荧光信号。PSA™成像技术可以轻松应用于任何检测过程中需要加入HRP的应用中,例如IHC,ICC,IF,  原位杂交和ELISA。

 

PSA™检测方法检测原理示意图

 

      图1.PSA™检测方法检测原理示意图。使用常规的检测方法,用未标记的一抗和HRP-二抗缀和物检测细胞或组织样品。HRP催化标记的Styramide™转化为高活性的Styramide™自由基,这些自由基与酶位点上或附近的酪氨酸残基共价结合。

 

       PSA™成像系统的优势

 

      每个HRP标签的多个Styramide™底物的快速催化和共价沉积所产生的Power Styramide™信号放大转化成了许多实际优势,包括简单,灵敏度和特异性增强以及与其他技术的兼容性。Styramide™基团的较高反应活性,使其在HRP-靶标相互作用位点更牢固,更快速地标记,从而比TSA产生更强的信号和更好的空间分辨率。

 

        PSA™特点及优势

 

       超灵敏的低丰度靶标检测,比IHC,ICC和IF方法高100倍

       高荧光强度,比酪酰胺(TSA)高10至50倍

       与其他荧光标记,染色技术和PSA™成像试剂盒兼容,可进行多重分析

       与放射线检测相比,PSA™自由基具有更高的反应活性,可提供更快的结果以及同等的灵敏度和分辨率

       保留珍贵的抗体,PSA™标记可减少一抗使用量,也能达到同等水平的灵敏度

       PSA™成像试剂盒易于使用,并提供足够的试剂用于100次测试

 

iFluor™594 Styramide™ (货号45035AlexaFluor®594 tyramide(货号11082

 

       优越的检测灵敏度

 

      将PSA™成像应用于免疫染色实验中,可以增加一抗稀释度,而不会使测定灵敏度降低。此外,增加一抗稀释度会降低非特异性背景信号,并克服固定方法不当或目标表达水平低引起的免疫标记不足。

 

Power Styramide™信号放大(PSA™)套件的灵敏度

 

      图3. Power Styramide™信号放大(PSA™)套件的灵敏度。固定,渗透并用不同浓度的兔抗微管蛋白一抗标记HeLa细胞。厂商建议的稀释度为1:500或2ug / ml。然后,在我们的iFluor™488 PSA™成像试剂盒中用山羊抗兔IgG,AlexaFluor®488标记的酪酰胺或AlexaFluor®488标记的山羊抗兔IgG的试剂对细胞进行染色。在相同条件下(使用FITC滤光片组并在相同的曝光时间下进行分析)从每种处理中捕获细胞图像。测量了相对荧光信号强度,并比较了不同检测方法之间的荧光强度。

 

        多种PSA™多重染色

 

       PSA™系统经过设计,可与其他荧光发生器,细胞和组织染色技术以及其他PSA™成像套件兼容,从而可以同时可视化多个目标。与TSA和荧光二抗相比,PSA™的检测阈值较低,还可以检测在同一宿主物种中产生的,但信号之间无明显串扰的两个靶标。PSA™成像兼容:

       荧光标记和复染物(例如DAPI,Hoechsts)

       荧光蛋白(例如GFP,YFP,RFP)

       其他Styramide™试剂

       其他PSA™成像套件

       酪酰胺试剂和酪酰胺成像试剂盒

 

iFluor™488 PSA™试剂盒(货号:45205

iFluor™555 PSA™试剂盒(货号45270

DAPI (货号17507 

合并后

 

      图4.使用iFluor™PSA™成像试剂盒对甲醛固定,石蜡包埋的人肺腺癌依次进行免疫染色。用兔抗EpCam抗体和带有山羊抗兔IgG(目录号45205)的iFluor™488 PSA™成像试剂盒标记EpCam,然后洗涤。用小鼠抗Pan Keratin抗体标记Pan-Keratin,iFluor™555 PSA™成像试剂盒带有山羊抗小鼠IgG(目录号45270)标记。细胞核用DAPI(目录号17507)标记。在共聚焦显微镜上采集图像。

 

        灵活的工作流程:与IHC,ICC,ISH和流式细胞仪兼容

 

       PSA™成像技术可适用于能在其检测方案中添加HRP的任何应用,并且与免疫学应用中常用的样品类型和荧光成像平台兼容。与传统的IHC,ICC,ISH和FC应用程序结合使用时,PSA™成像可显著提高检测灵敏度,而不会降低图像分辨率或增加背景信号。

 

PSA™成像技术


       1. 免疫细胞化学(ICC)

 

      HL-60细胞的CD45表面受体染色。Hl-60细胞用4%甲醛固定,通透并用0.2 µg / mL抗CD45一抗标记。然后将细胞用iFluor™647 Styramide™染色,并使用Cy5滤光片拍摄的荧光图像。

 

免疫细胞化学

 

        2. 原位杂交(ISH)

 

      使用生物素化的PNA探针通过原位杂交着丝粒进行染色。使用标准方案将Jurkat细胞固定并透化,用链霉亲和素HRP缀合物检测每个染色体的着丝粒,并用iFluor 488苯乙烯酰胺试剂可视化,用DAPI染色细胞核。

 

原位杂交

 

      3. 流式细胞仪

 

     使用iF488标记的山羊抗兔IgG方法,酪酰胺方法或苯乙烯酰胺方法对Jurkat细胞中的pAKT进行流式细胞分析。苯乙烯酰胺扩增方法的信号强度比山羊抗兔IgG-iFluor™488直接染色高10倍,比Alexa Fluor 488酪酰胺染料染色高5倍。

 

流式细胞仪

 

        PSA™成像工作流程:

 

       PSA™成像利用辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性在原位生成目标蛋白或核酸序列的高密度标记。与IHC,ICC和ISH程序的常规工作流程相似,PSA™成像易于执行,包括几个简单的过程。在此工作流程中,将荧光二抗替换为多HRP标记二抗,唯一的附加步骤是与标记的Styramide™一起孵育。

 

      1.固定,透化和封闭细胞或组织样品。用未标记的一抗,生物素化一抗或生物素化核酸探针孵育样品。

      2.加入HRP标记二抗或HRP-链霉亲和素偶联物。

      3.添加iFluor™染料Styramide™工作溶液,进行HRP催化的Styramide™沉积。

      4.装入样品并检测信号。

 

PSA™成像工作流程

 

      图5. Power Styramide™信号放大(PSA™)的工作流程。通过类似于常规ICC和IHC方法的工作流程,PSA™试剂盒和Styramide™试剂可以通过几个简单的步骤就可以对所需目标物进行灵敏检测。

 

        Power Styramide™信号放大相关产品信息汇总:

 

 

Styramide™货号Ex (nm)Em (nm)滤光片消光系数量子产率
iFluor™ 350 Styramide™45000345442DAPI20,0000.95
iFluor™ 488 Styramide™45020491514FITC75,0000.9
iFluor™ 546 Styramide™45025541557Cy3/TRITC100,0000.67
iFluor™ 555 Styramide™45027552567Cy3/TRITC100,0000.64
iFluor™ 568 Styramide™45030568587Cy3/TRITC100,0000.57
iFluor™ 594 Styramide™45035587603Cy3/TRITC180,0000.53
iFluor™ 647 Styramide™45045654669Cy5250,0000.25
iFluor™ 680 Styramide™45050683700Cy5220,0000.23
iFluor™ 700 Styramide™45055690713Cy7220,0000.23
iFluor™ 750 Styramide™45065759777Cy7275,0000.12
iFluor™ 790 Styramide™45070786811Cy7250,000 0.13


 

      艾美捷科技有限公司,通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链管理,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。我们的企业的核心价值观:“激情、敬业、学习、创新、合作、卓越”。激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值是我们的企业使命。我们的企业愿景是成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

 

       作为一家具有尖端的技术实力、一流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷国家级高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

      艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、Cayman Chemical、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

 

                三点:

                   企业使命:激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值。

                   企业愿景:成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。

                      艾美捷定位:通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。

                   六观:

                   价值观激情、敬业、学习、创新、合作、卓越。

 

 

 

  • 高品质保障 成熟的生产研发技术
  • 高性价比 价宜质优,性价比高
  • 高效省心 从购买到使用,放心无忧
  • 安全运输 完善的保护措施安全运输

微信扫码在线客服

微信咨询

全国免费技术支持

400-6800-868

在线客服